[發明專利]用于創傷調理和皮膚護理的新型蛋白酶

有效

• 申請號: 201080015247.0
• 申請日: 2010-03-03
• 公開（公告）號: CN102388135A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: F·尼豪斯;J·埃克;R·舒爾茨;M·克羅恩
• 申請（專利權）人: B.R.A.I.N.生物技術研究和信息網絡公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;C07K16/40;A61K38/43;C12N15/62;C12N5/10
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 丁香蘭;龐東成

本發明涉及一種含有蛋白酶的用于創傷調理和皮膚護理的藥物組合物和化妝品組合物以及醫藥產品，所述蛋白酶來自絲光綠蠅(Lucilia?sericata)，并被稱為清創酶(debrilase)。清創酶是通過使用幼蟲轉錄物組(即，mRNA制備物)并將其轉變為cDNA而鑒定出的，并且通過使用重組技術和隨后在適合的宿主細胞中表達而制得。本發明的蛋白酶具有纖維蛋白水解活性、酪蛋白水解活性和PAR-2(蛋白酶激活受體2)激活活性。在一個實施方式中，提供了含有清創酶的組合物，用來清潔由壞死細胞、組織和纖維蛋白圍袖(fibrin?cuff)引起的緩慢愈合或不愈合的創傷，這一過程被稱為清創。在另一個實施方式中，提出了清創酶在皮膚護理和皮膚光滑化領域中的化妝品用途。

本發明還涉及編碼具有切割纖維蛋白和酪蛋白能力的絲氨酸蛋白酶的核酸分子，所述核酸分子是編碼包含氨基酸序列SEQ?ID?NO：4或由氨基酸序列SEQ?ID?NO：4組成的絲氨酸蛋白酶的核酸分子，本發明還涉及編碼上述絲氨酸蛋白酶的前體或片段的核酸分子。此外，本發明涉及包含核苷酸序列SEQ?ID?NO：3或由核苷酸序列SEQ?ID?NO：3組成的核酸分子，和與核苷酸序列SEQ?ID?NO：3的同一性為至少77％、更優選為至少80％、進一步優選為至少85％且最優選為至少90％的編碼絲氨酸蛋白酶的核酸分子。在其中T被U置換了的任何上述核酸也在本發明的范圍中。

在本說明書中，引用了包括專利申請和制造商的手冊在內的多個文獻。不認為這些文獻的公開內容與本發明的專利性有關，并通過引用將其完整地并入本文中。更具體而言，將所參考的所有文獻通過引用并入本文中，其程度相當于特定地且單獨地指明將每個單獨的文獻都通過引用并入本文中。

創傷愈合有三個不同階段：(1)炎癥；(2)細胞遷移和增殖；和(3)重塑。在炎癥階段，免疫系統的細胞會釋放蛋白酶。嗜中性粒細胞和巨噬細胞會分泌出對創傷愈合的下一階段進行調節的各種淋巴因子。第二階段稱為增殖階段，該階段包括成纖維細胞遷移、增殖和新的細胞外基質分子的合成。這些事件看似是以確定的順序出現，在此情況下包括纖維連接蛋白、膠原和蛋白聚糖在內的細胞外基質分子被分泌至肉芽床(granulation?bed)中。炎癥階段在3天時達到峰值。創傷愈合的第二階段通常在受傷后約1到2周達到峰值，隨后是更加長久的第三階段，即組織重塑，該階段在幾周內開始并可能持續數月。在重塑階段，當已破壞的膠原纖維被更厚更有序排列的膠原分子置換時，結締組織基質變成熟。這種組織重塑最終增加了創傷的抗張強度，且有時伴有瘢痕形成。

皮膚損傷基本上總會涉及對血管的傷害。因此，創傷愈合還包括凝血過程，凝血過程是血液形成凝塊的復雜過程。該過程為止血的重要環節，通過該過程，含有血小板和纖維蛋白的凝塊會覆蓋受損的血管壁，從而使流血停止并開始修復受損血管。凝血紊亂會使出血和/或形成血栓的風險升高。在血管所受的傷害已經對內皮造成損傷后，幾乎會立即引發凝血。血小板會在受傷部位立刻形成止血栓(初期止血)。在血漿中的凝血因子以復雜的級聯反應做出響應從而形成強化血小板栓的纖維蛋白股的同時，發生二期止血。二期止血的凝血級聯反應有兩種途徑，即接觸活化途徑(舊稱內源性途徑)和組織因子途徑(舊稱外源性途徑)，這兩種途徑均導致纖維蛋白的形成。現已知，血液凝固啟動的主要途徑是組織因子途徑。這些途徑為一系列反應，其中絲氨酸蛋白酶的酶原(無活性的酶前體)及其糖蛋白輔助因子經活化而變成具有活性的組分，該組分隨后催化級聯中的下一個反應，并最終形成交聯的纖維蛋白。除了FVIII和FV是糖蛋白并且因子XIII是轉谷氨酰胺酶之外，凝血因子通常為絲氨酸蛋白酶。通常凝血級聯劃分為三個途徑。組織因子途徑和接觸活化途徑均會激活因子X、凝血酶和纖維蛋白的“最終共同途徑”。

纖維蛋白是參與血液凝塊形成的蛋白。其為纖維狀蛋白，其經聚合而與血小板一起在創傷部位上形成止血栓或凝塊。纖維蛋白是從其酶原纖維蛋白原轉變而來，纖維蛋白原是由肝臟合成的可溶的血漿糖蛋白。在凝血級聯反應中，酶原凝血酶原(prothrombin)經活化而成為絲氨酸蛋白酶凝血酶，凝血酶負責將纖維蛋白原轉變為纖維蛋白。隨后纖維蛋白通過因子XIII而發生交聯，從而形成凝塊。

纖溶酶以蛋白水解方式將纖維蛋白切割成纖維蛋白降解產物，纖維蛋白降解產物抑制過多的纖維蛋白形成。纖溶酶是通過對纖溶酶原進行蛋白水解式切割而產生的，纖溶酶原是在肝臟中合成的血漿蛋白。內皮合成并分泌的組織纖溶酶原激活劑(t-PA)催化上述切割。纖溶酶原在凝塊形成過程中被捕集，并在創傷已停止流血且凝塊分解時被緩慢激活。