[發明專利]識別基因型的方法

有效

• 申請號: 201080014225.2
• 申請日: 2010-03-26
• 公開（公告）號: CN102369297A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 山根明男;中山尚母;北野史朗
• 申請（專利權）人: 凸版印刷株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/09;G01N21/78;G01N33/50;G01N33/566
• 代理公司: 隆天國際知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 崔香丹;洪燕

1.一種識別基因型的方法，是識別基因突變中的基因型的方法，其特征在于，包括：

核酸擴增工序，通過核酸擴增反應對具有試樣中所含基因中的突變位點的區域進行擴增，獲得含有試樣雙鏈核酸的擴增反應液；以及

識別工序，通過將上述核酸擴增工序中所獲得的擴增反應液與上述突變位點為特定基因型并且由標記物質所標記的標準雙鏈核酸加以混合而進行競爭性鏈置換反應，并測定標準雙鏈核酸與試樣雙鏈核酸之間發生鏈置換的程度，由此識別上述標準雙鏈核酸與上述試樣雙鏈核酸的同一性，

并且，上述競爭性鏈置換反應是在抑制了由聚合酶引起的延伸反應的條件下進行。

2.如權利要求1所述的識別基因型的方法，其特征在于，

上述競爭性鏈置換反應是在延伸反應抑制劑的存在下進行。

3.如權利要求2所述的識別基因型的方法，其特征在于，上述延伸反應抑制劑是螯合劑。

4.如權利要求3所述的識別基因型的方法，其特征在于，上述延伸反應抑制劑是EDTA，上述競爭性鏈置換反應的反應液中的EDTA濃度為15mM以上。

5.如權利要求2所述的識別基因型的方法，其特征在于，上述延伸反應抑制劑是DNA合成抑制劑。

6.如權利要求1所述的識別基因型的方法，其特征在于，在競爭性鏈置換反應之前，對上述核酸擴增工序中所獲得的擴增反應液進行熱處理。

7.如權利要求1所述的識別基因型的方法，其特征在于，在競爭性鏈置換反應之前，對上述核酸擴增工序中所獲得的擴增反應液，進行單鏈核酸分解處理或者核苷三磷酸分解處理。

8.如權利要求1～7中任一項所述的識別基因型的方法，其特征在于，

在構成上述標準雙鏈核酸的兩條核酸鏈中，分別地，通過第一標記物質標記一條鏈的3′端部，通過第二標記物質標記另一條鏈的5′端部，

上述第一標記物質和上述第二標記物質是能夠互相進行能量轉移的物質，

通過測定由上述第一標記物質和上述第二標記物質之間的能量轉移引起的能量變化的程度，測定上述識別工序中的標準雙鏈核酸與試樣雙鏈核酸之間鏈置換的發生程度。

9.如權利要求8所述的識別基因型的方法，其特征在于，

上述第一標記物質和上述第二標記物質中的至少一者是熒光物質，

上述識別工序中的競爭性鏈置換反應是通過將含有上述標準雙鏈核酸和上述試樣雙鏈核酸的反應液的溫度從高溫慢慢降低而進行，

并且，基于由上述反應液的溫度降低引起的熒光強度的變化量與由不含上述試樣雙鏈核酸而含上述標準雙鏈核酸的對照反應液的溫度降低引起的熒光強度的變化量的比值，測定標準雙鏈核酸與試樣雙鏈核酸之間鏈置換的發生程度。

10.一種基因型識別用試劑盒，是通過權利要求1所述的識別基因型的方法識別基因型所用的試劑盒，其特征在于，具有：

選自于由延伸反應抑制劑、單鏈核酸分解酶和核苷三磷酸分解酶所組成的組中的一種以上；

用于制備試樣雙鏈核酸的核酸擴增試劑；以及

在標準核酸的一條鏈的5′端部導入了一種標記物質而在標準核酸的另一條鏈的3′端部導入了另一種標記物質的標準雙鏈核酸。