[發明專利]產生C4二羧酸的方法

無效

• 申請號: 201080012963.3
• 申請日: 2010-03-23
• 公開（公告）號: CN102361881A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 貝絲·范特蘭德-布魯姆;約翰·拉雅帕蒂
• 申請（專利權）人: 阿徹丹尼爾斯米德蘭德公司
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C12N15/63
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 陶貽豐;鄭霞

1.一種分離的或重組的多核苷酸，所述多核苷酸包括選自由以下組成的組的序列：

編碼包括SEQ?ID?NO：2的多肽的多核苷酸序列；

與所述編碼包括SEQ?ID?NO：2的多肽的多核苷酸序列完全互補的核苷酸序列；和

在嚴格條件下與所述與所述編碼包括SEQ?ID?NO：2的多肽的多核苷酸序列完全互補的核苷酸序列雜交的序列，所述嚴格條件包括65℃下0.2×SSC。

2.如權利要求1所述的分離的或重組的多核苷酸，所述多核苷酸還包括與所述多核苷酸序列可操作地連接的啟動子。

3.如權利要求1或權利要求2所述的分離的或重組的多核苷酸，其中所述編碼包括SEQ?ID?NO：2的多肽的多核苷酸序列是SEQ?ID?NO：1。

4.一種載體，所述載體包括權利要求1-3中任一項所述的分離的或重組的多核苷酸。

5.如權利要求4所述的載體，其中所述多核苷酸序列選自由開放閱讀框、編碼反義RNA的序列和編碼干擾RNA的序列組成的組。

6.一種載體，所述載體包括：

啟動子；和

用于表達根霉屬(Rhizopus)來源的丙酮酸羧化酶蛋白的元件。

7.如權利要求6所述的載體，其中用于表達所述丙酮酸羧化酶蛋白的所述元件包括SEQ?ID?NO：1。

8.如權利要求6或權利要求7所述的載體，其中用于表達所述丙酮酸羧化酶蛋白的所述元件包括編碼SEQ?ID?NO：2的多核苷酸序列。

9.如權利要求6-8中任一項所述的載體，其中所述丙酮酸羧化酶是米根霉(Rhizopus?oryzae)來源的。

10.一種宿主細胞，所述宿主細胞包括權利要求6-9中任一項所述的載體。

11.如權利要求10所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是選自由以下組成的組的屬的：根霉屬、酵母屬(Saccharomyces)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、畢赤酵母屬(Pichia)、曲霉屬(Aspergillus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、大腸桿菌(Escherichia?coli)、棒狀菌屬(Corynebacterium)、短桿菌屬(Brevibacterium)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、變形菌屬(Proteus)、腸桿菌屬(Enterobacter)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、歐文氏菌屬(Erwinia)、黃單胞菌屬(Xanthomonas)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、鏈球菌屬(Streptococcus)、乳球菌屬(Lactococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)和腸球菌屬(Enterococcus)。

12.如權利要求10或權利要求11所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是絲狀真菌。

13.如權利要求10-12中任一項所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是曲霉屬的。

14.一種產生C4二羧酸的方法，所述方法包括：

在培養基中培養用選自由以下組成的組的序列轉化的重組細胞：SEQ?ID?NO：1；SEQ?ID?NO：1的全長互補序列；與SEQ?ID?NO：1具有至少95％序列同一性且編碼具有丙酮酸羧化酶活性的多肽的序列；編碼包括SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列的多肽的序列；和編碼具有丙酮酸羧化酶活性的多肽的多核苷酸的序列，其中該多核苷酸與多核苷酸SEQ?ID?NO：1的全長互補序列在嚴格條件下雜交，所述嚴格條件包括65℃下0.2×SSC；和

從所述培養基回收所述C4二羧酸。

15.如權利要求14所述的方法，其中所述重組細胞是選自由以下組成的組的屬的：根霉屬、酵母屬、鏈霉菌屬、畢赤酵母屬、曲霉屬、乳桿菌屬、大腸桿菌、棒狀菌屬、短桿菌屬、假單胞菌屬、變形菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸桿菌屬、歐文氏菌屬、黃單胞菌屬、黃桿菌屬、鏈球菌屬、乳球菌屬、明串珠菌屬和腸球菌屬。

16.如權利要求14或權利要求15所述的方法，其中所述重組細胞是絲狀真菌。

17.如權利要求16所述的方法，其中所述絲狀真菌是曲霉屬。