[發明專利]用于在化學成分確定的培養基中培養細胞的可溶脹(甲基)丙烯酸酯表面

無效

• 申請號: 201080010641.5
• 申請日: 2010-01-29
• 公開（公告）號: CN102378812A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: A·法捷耶夫;J·格曼;A·W·馬丁;Z·梅爾寇米揚;C·B·紹戈本;D·M·韋伯;周悅
• 申請（專利權）人: 杰龍公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 崔佳佳

相關申請的交叉引用

本申請要求2008年1月30日提交的名為“Synthetic?Surfaces?for?Culturing?Undifferentiated?Stem?Cells?in?Chemically?Defined?Media(用于在化學成分確定的培養基中培養未分化干細胞的合成表面)”的美國臨時申請序列第61/062,890號，2008年1月30日提交的、名為“Stem?Cell?Article?and?Screening(干細胞制品和篩選)”的美國臨時申請序列第61/062,937號和2009年1月30日提交的、名為“Swellable(Meth)Acrylate?Surfaces?for?Culturing?Cells?in?Chemically?Defined?Media(用于在化學成分確定的培養基中培養細胞的可溶脹(甲基)丙烯酸酯表面)”的美國申請序列第12/362,974號的優先權。

技術領域

本發明涉及細胞培養制品，更具體地說，涉及用于在化學成分確定的培養基中支持未分化干細胞培養的合成表面和制品。

背景技術

多能干細胞，如人胚胎干細胞(hESC)具有分化為三種胚層中的任一種的能力，從而在人體中形成任何成人細胞類型。對于大量嚴重的細胞退化疾病，如糖尿病、脊髓損傷、心臟病等來說，這種獨特的性能為開發新治療方法提供了可能性。然而，開發這種hESC治療方法有障礙。此類障礙包括在細胞和組織培養中獲得并維持足夠量的未分化hESC和控制其分化以產生特定細胞類型。干細胞培養，如hESC細胞培養通常用細胞庫或細胞儲備物的少量細胞接種，然后在未分化的狀態下擴增，直至給定的治療用途需要分化。為達到這點，目前在含有來源于動物的成分(如滋養層、胎牛血清或MATRIGEL)的表面或培養基存在下培養hESC或其分化細胞。向培養環境添加這些來源于動物的東西使得細胞接觸可能有害的病毒或其它傳染性物質，這些有害的病毒或其它傳染性物質會轉移給患者或損害hESC的常規培養和維持。此外，此類生物產品易產生批次差異、免疫反應，且存儲壽命有限。

目前為止，尚未發現利用化學成分確定的培養基和合成表面的完全不含動物產品的體系來支持未分化細胞的長期培養。

發明內容

在一些實施方式中，本發明的合成表面可用于在化學成分確定的培養基存在下，培養未分化的人胚胎干細胞或其它細胞超過5代。在其它實施方式中，可采用輻射技術，包括γ射線和電子束輻射來對本發明的合成表面進行滅菌。

在本發明的實施方式中，提供了在化學成分確定的培養基中，在通過γ射線滅菌的合成培養表面上培養分離的未分化人胚胎干細胞群的方法。在其它實施方式中，培養分離的未分化人胚胎干細胞可維持存活至少五代。

細胞培養制品包括具有表面的基片。在本發明的實施方式中，可溶脹(甲基)丙烯酸酯層置于細胞培養基片的表面上。可利用包含甲基丙烯酸羥乙酯、丙烯酸2-羧基乙酯和二甲基丙烯酸四(乙二醇)酯的組合物形成可溶脹(甲基)丙烯酸酯層。在其它實施方式中，多肽可偶聯到可溶脹丙烯酸酯層。多肽可包含Xaa_nProGlnValThrArgGlyAspValPheThrMetPro(SEQ?ID?NO：1)所示氨基酸序列，其中n是0-3的整數，Xaa_n是任何氨基酸。在一些實施方式中，Xaa_n可以是LysGlyGly，(LysGlyGlyProGlnValThrArgGlyAspValPheThrMetPro(SEQ?ID?NO：5)。在一些實施方式中，可采用γ射線滅菌技術對細胞培養制品進行滅菌。在其它實施方式中，細胞培養制品可支持在化學成分確定的培養基中培養和維持未分化干細胞，例如人胚胎干細胞。