[發(fā)明專利]用于在化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞的可溶脹(甲基)丙烯酸酯表面

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080010641.5
• 申請(qǐng)日: 2010-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN102378812A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·法捷耶夫;J·格曼;A·W·馬丁;Z·梅爾寇米揚(yáng);C·B·紹戈本;D·M·韋伯;周悅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杰龍公司
• 主分類號(hào): C12N5/00
• 分類號(hào): C12N5/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 崔佳佳

1.一種培養(yǎng)分離的未分化干細(xì)胞群的方法，包括：

提供經(jīng)輻射滅菌的合成培養(yǎng)表面；

在該合成培養(yǎng)表面上提供未分化干細(xì)胞；

在化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該未分化干細(xì)胞；以及

在化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基中維持培養(yǎng)未分化干細(xì)胞至少五代。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述干細(xì)胞包括未分化的人胚胎干細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述干細(xì)胞包括H1或H7細(xì)胞。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述合成表面包含

可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其中所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層由包含丙烯酸2-羧基乙酯、二甲基丙烯酸四(乙二醇)酯和以下一種的組合物形成：甲基丙烯酸羥乙酯、甲基丙烯酸羥丙酯、丙烯酸2-羥乙酯、1-乙烯基-2-吡咯烷酮、二(乙二醇)乙醚甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯或3-磺基丙基二甲基-3-甲基丙烯酰胺基丙基銨；以及

包含XaanProGlnValThrArgGlyAspValPheThrMetPro(SEQ?ID?NO：1)所示氨基酸序列的多肽，其中n是0到3的整數(shù)，Xaa是任何氨基酸；

其中該肽偶聯(lián)于所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層。

5.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層不含多肽交聯(lián)劑。

6.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層由包含甲基丙烯酸羥乙酯、丙烯酸2-羧基乙酯和二甲基丙烯酸四(乙二醇)的組合物形成。

7.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層由包含約60體積％-90體積％的甲基丙烯酸羥乙酯、約10體積％-40體積％的丙烯酸2-羧基乙酯和約1體積％-5體積％的二甲基丙烯酸四(乙二醇)酯的組合物形成。

8.如權(quán)利要求6所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，甲基丙烯酸羥乙酯/丙烯酸2-羧基乙酯/二甲基丙烯酸四(乙二醇)酯的體積比是約80/20/3。

9.如權(quán)利要求8所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，甲基丙烯酸羥乙酯/丙烯酸2-羧基乙酯/二甲基丙烯酸四(乙二醇)酯在溶劑中的百分比是0.1％到99.5％。

10.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層由基本上由體積比約80/20/3的甲基丙烯酸羥乙酯/丙烯酸2-羧基乙酯/二甲基丙烯酸四(乙二醇)酯構(gòu)成的組合物形成。

11.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層是均勻?qū)印?/p>

12.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，所述肽以每平方毫米可溶脹(甲基)丙烯酸酯表面約5皮摩爾的密度偶聯(lián)于所述可溶脹(甲基)丙烯酸酯層。

13.如權(quán)利要求4所述的可溶脹(甲基)丙烯酸酯層，其特征在于，還包含含有LysGlyGlyProQlnValThrArgGlyAspValPheThrMetPro(SEQ?ID?NO：6)所示氨基酸序列的肽。

14.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基包含堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1。

15.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基包含約80ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和約0.5ng/ml轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1。

16.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基中，至少一種未分化人胚胎干細(xì)胞維持培養(yǎng)至少10代。

17.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述γ輻射包括10-25kGy處理。