[發(fā)明專(zhuān)利]通過(guò)不同的翻譯后修飾改變和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)活性

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080008795.0
• 申請(qǐng)日: 2010-02-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102317309A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·N·湯普森;D·W·瑞德;V·S·湯普森;J·A·萊西;W·A·阿佩爾
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 巴特勒能源同盟有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/195
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/195;C12P21/02
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

優(yōu)先權(quán)聲明

本申請(qǐng)要求2010年1月12日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第12/655,993號(hào)“ALTERATION?AND?MODULATION?OF?PROTEIN?ACTIVITY?BY?VARYING?POST-TRANSLATIONAL?MODIFICATION(通過(guò)不同的翻譯后修飾改變和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)活性)”的提交日權(quán)益，該申請(qǐng)作為部分繼續(xù)申請(qǐng)案，根據(jù)35U.S.C.§119要求2009年2月26日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第12/380,450號(hào)和2009年2月26日提交的PCT國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2009/035307號(hào)的優(yōu)先權(quán)。

政府權(quán)利

本發(fā)明根據(jù)美國(guó)能源部授予的合同號(hào)DE-AC07-99ID13727和DE-AC07-05ID14517在政府支持下產(chǎn)生。政府具有本發(fā)明的某些權(quán)利。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明大體上涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的實(shí)施方案涉及蛋白質(zhì)的翻譯后修飾。

背景技術(shù)

直到最近，人們認(rèn)為細(xì)菌通常并未使其蛋白質(zhì)糖基化。雖然已報(bào)道一些例子，但這些被當(dāng)作罕見(jiàn)的異常情況而摒棄(Borman?2006)。現(xiàn)在人們逐漸接受細(xì)菌以比真核生物可能更多的方式使其蛋白質(zhì)糖基化，盡管這種看法尚未得到廣泛認(rèn)同(等，2001)。在最近的評(píng)論文章中聲明，已顯示糖基化有助于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)物理性質(zhì)(如溶解性)、保護(hù)蛋白質(zhì)免受水解、改變活性和靶向外化(Upreti等，2003)。1994年，一組人員從酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(Alicyclobacillus?acidocaldarius)中純化淀粉酶并表示該淀粉酶在活性生長(zhǎng)期間與細(xì)胞結(jié)合(Schwermann等，1994)。隨著培養(yǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期，細(xì)胞將活性可溶糖基化形式的淀粉酶釋放至培養(yǎng)基中(Schwermann等，1994)。未嘗試比較各種形式的淀粉酶的活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的實(shí)施方案包括通過(guò)用化學(xué)糖基化的方式和/或分離的或部分純化的糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白、包含糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞提取物，和/或在包含一種或多種糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞中改變極端酶或其它蛋白質(zhì)的酶活性的方法。本發(fā)明的實(shí)施方案包括翻譯后修飾蛋白質(zhì)的方法。在一些實(shí)施方案中，翻譯后修飾可通過(guò)使用糖基化(包括化學(xué)糖基化)、聚乙二醇化、磷酸化、甲基化或其它形式的翻譯后修飾的方式進(jìn)行，和/或是分離的或部分純化的糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白，包含糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞提取物，和/或在包含一種或多種糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞中。本發(fā)明的實(shí)施方案包括翻譯后修飾蛋白，所述翻譯后修飾蛋白包括但不限于SEQ?ID?NOS：307(celB)、331(內(nèi)切葡聚糖酶C)、333(肽聚糖N-乙酰氨基葡萄糖脫乙酰酶)、335(β-半乳糖苷酶)、337(阿拉伯呋喃糖苷酶)和338(α-木糖苷酶)。因此實(shí)施方案包括上述蛋白質(zhì)的糖基化形式。

本發(fā)明的第一方面涉及從極端微生物分離的酶，所述酶在溫度高于約80℃和pH低于約2時(shí)顯示最佳的酶活性。

本發(fā)明的另一方面涉及來(lái)源于酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC?27009)的半纖維素酶。

本發(fā)明的再一方面涉及用于降解復(fù)合生物分子的酶。

更進(jìn)一步地，本發(fā)明的再一方面涉及可用于同時(shí)糖化和發(fā)酵過(guò)程以將生物質(zhì)糖轉(zhuǎn)化為終產(chǎn)物的酶。

本發(fā)明的再一方面涉及處理生物質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟：提供具有生物質(zhì)糖的生物質(zhì)源，用來(lái)源于酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC?27009)的水溶性半纖維素酶預(yù)處理生物質(zhì)以產(chǎn)生終產(chǎn)物。

本發(fā)明的再一方面涉及制備半纖維素酶的方法，所述方法包括以下步驟：提供酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC?27009)源；在有上清液的微生物營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC?27009)；從營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上清液中分離酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌的細(xì)胞；以及從營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上清液回收并純化來(lái)源于酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC?27009)的半纖維素酶。

而且，本發(fā)明的再一方面涉及水解多糖的方法，所述方法包括以下步驟：提供來(lái)源于微生物的水溶性半纖維素酶；在pH低于約2時(shí)用水溶性半纖維素酶進(jìn)行多糖的水解。

以下將更詳細(xì)地描述本發(fā)明的這些和其它方面。

附圖簡(jiǎn)述