[發明專利]通過不同的翻譯后修飾改變和調節蛋白質活性

無效

• 申請號: 201080008795.0
• 申請日: 2010-02-26
• 公開（公告）號: CN102317309A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: D·N·湯普森;D·W·瑞德;V·S·湯普森;J·A·萊西;W·A·阿佩爾
• 申請（專利權）人: 巴特勒能源同盟有限公司
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12P21/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一種分離的和/或純化的糖基化蛋白，其中所述糖基化蛋白包括SEQ?ID?NO：307。

2.一種改變極端酶的酶活性的方法，所述方法包括：

使所述極端酶與能夠使所述極端酶糖基化的分離的和/或純化的酶或化學體系進行流體接觸；以及

使所述極端酶糖基化。

3.根據權利要求2所述的方法，其中從生物中分離和/或純化能夠使所述極端酶糖基化的所述分離的和/或純化的酶。

4.根據權利要求3、9、10、13、18和22任一項所述的方法，其中所述生物選自酸熱脂環酸芽孢桿菌(Alicyclobacillus?acidocaldarius)和畢赤酵母(Pichia?pastoris)。

5.根據權利要求2、9和10任一項所述的方法，其中所述極端酶為嗜熱嗜酸菌的極端酶。

6.根據權利要求2、9和10任一項所述的方法，其中所述極端酶選自SEQ?ID?NOS：307、337和338。

7.根據權利要求2、9和10任一項所述的方法，其中與非糖基化形式的極端酶相比，所述極端酶具有改變的纖維素酶、木聚糖酶或β-木糖苷酶活性。

8.根據權利要求2、9和10任一項所述的方法，其中在選自低于約5、約3.5和約2的pH下，或在選自低于約90℃、約80℃、約70℃、約60℃和約50℃的溫度下，與非糖基化形式的極端酶相比，所述糖基化極端酶具有改變的纖維素酶、木聚糖酶或β-木糖苷酶活性。

9.一種改變極端酶的酶活性的方法，所述方法包括：

使所述極端酶與能夠使所述極端酶糖基化的生物細胞提取物進行流體接觸；以及

使所述極端酶糖基化。

10.一種改變極端酶的酶活性的方法，所述方法包括：

為能夠表達所述極端酶并使所述極端酶糖基化的生物提供編碼所述極端酶的核酸；以及

由所述生物產生糖基化形式的極端酶。

11.根據權利要求10和22任一項所述的方法，其中所述編碼蛋白質的核酸進一步包含分泌信號。

12.一種通過根據權利要求2、9和10任一項所述的方法產生的分離的和/或純化的極端酶。

13.一種翻譯后修飾目標蛋白質的方法，所述方法包括：

使目標蛋白質與從能夠使所述目標蛋白質糖基化的生物分離的糖基轉移酶進行流體接觸。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述糖基轉移酶選自SEQID?NOS：1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290的糖基轉移酶。

15.根據權利要求13所述的方法，其中所述目標蛋白質為極端酶。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述極端酶選自SEQ?ID?NOS：307、331、333、335、337和338。

17.根據權利要求13、18和22任一項所述的方法，其中所述翻譯后修飾包括糖基化。

18.一種翻譯后修飾目標蛋白質的方法，所述方法包括：使目標蛋白質與嗜熱嗜酸生物的細胞提取物進行流體接觸。

19.根據權利要求18和22任一項所述的方法，其中所述嗜熱嗜酸生物為酸熱脂環酸芽孢桿菌。

20.根據權利要求18所述的方法，其中所述目標蛋白質為嗜熱嗜酸菌的酶。

21.根據權利要求18和22任一項所述的方法，其中所述目標蛋白質選自SEQ?ID?NOS：307、331、333、335、337和338。

22.一種使目標蛋白質糖基化的方法，所述方法包括：

為嗜熱嗜酸生物提供編碼所述目標蛋白質的核酸；以及

在所述嗜熱嗜酸生物中產生所述目標蛋白質。

23.根據權利要求22所述的方法，其中所述目標蛋白質為嗜熱嗜酸菌的內切葡聚糖酶和/或木聚糖酶。

24.一種通過根據權利要求13、18和22所述的方法的任意一種產生的分離的和/或純化的蛋白質。

25.一種分離的和/或純化的糖基化蛋白，其中所述蛋白選自SEQ?ID?NOS：307、331、333、335、337和338。