[發(fā)明專利]用于檢測(cè)乙型肝炎病毒的寡核苷酸探針及引物

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080007639.2
• 申請(qǐng)日: 2010-01-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102317474A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曼尤拉·賈甘納特;錢(qián)德拉塞克哈爾·布哈斯卡拉恩·奈爾;皮拉里塞蒂·文卡塔·蘇巴拉奧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 彼格泰格私人有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 李丙林;張英

1.寡核苷酸探針SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其中所述探針是雙重標(biāo)記的探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其中所述探針檢測(cè)乙型肝炎病毒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其中所述探針與在5′端具有熒光團(tuán)而在內(nèi)部區(qū)域或3′端具有淬滅基團(tuán)的可檢測(cè)標(biāo)記結(jié)合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其中所述SEQ?ID?No.1被設(shè)計(jì)成針對(duì)乙型肝炎病毒的表面基因，而SEQ?ID?No.2被設(shè)計(jì)成針對(duì)乙型肝炎病毒的X-基因區(qū)域。

6.引物SEQ?ID?No.3、4、5和6。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的引物，其中所述引物SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.5分別是正義的引物，而SEQ?ID?No.4和SEQ?ID?No.6分別是反義的引物。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的引物，其中所述引物SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4用于SEQ?ID?No.1的雙重標(biāo)記的探針，而引物SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6用于SEQ?ID?No.2的雙重標(biāo)記的探針。

9.一種用于檢測(cè)乙型肝炎病毒的PCR反應(yīng)混合物，所述混合物包含核酸擴(kuò)增試劑、SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2中列出的雙重標(biāo)記的探針、引物SEQ?ID?No.3、4、5、6和測(cè)試樣品。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的PCR反應(yīng)混合物，其中所述樣品選自由血液、血清和血漿組成的組。

11.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述PCR是實(shí)時(shí)PCR。

12.一種檢測(cè)乙型肝炎病毒的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)形成包含核酸擴(kuò)增試劑、分別具有相應(yīng)的引物SEQ?ID?No.3和4或SEQ?ID?No.5和6的寡核苷酸探針SEQ?ID?No.1或SEQ?ID?No.2、測(cè)試樣品的反應(yīng)混合物；和

(b)將所述反應(yīng)混合物進(jìn)行PCR以獲得所述靶序列的拷貝，接著測(cè)定用于檢測(cè)所述乙型肝炎病毒的熒光信號(hào)的增加。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述探針與在5′端具有熒光團(tuán)而在內(nèi)部區(qū)域或在3′端具有淬滅基團(tuán)的可檢測(cè)標(biāo)記結(jié)合。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述引物SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.5分別是正義的引物，而SEQ?ID?No.4和SEQ?ID?No.6分別是反義的引物。

15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述測(cè)試樣品選自由血液、血清和血漿組成的組。

16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述擴(kuò)增試劑包括氯化鎂、Taq聚合酶和用于擴(kuò)增的緩沖液。

17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述檢測(cè)本質(zhì)上是定性的或定量的。

18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述熒光團(tuán)選自由熒光素及熒光素衍生物FAM、VIC、JOE、5-(2’-氨乙基)氨基萘-1-磺酸、香豆素及香豆素衍生物、熒光黃、德克薩斯紅、四甲基若丹明、6-羧基熒光素、四氯-6-羧基熒光素、5-羧基若丹明和花青染料組成的組。

19.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述淬滅基團(tuán)選自由四甲基若丹明[TAMRA]、4’-(4-二甲基氨基苯基偶氮)苯甲酸、4-二甲基氨基苯基偶氮苯基-4’-馬來(lái)酰亞胺、四甲基若丹明、羧基四甲基若丹明和BHQ染料組成的組。

20.根據(jù)權(quán)利要求18和19所述的方法，其中所述熒光團(tuán)優(yōu)選是在5′端的6-羧基熒光素，而所述淬滅基團(tuán)優(yōu)選是在3′端的四甲基若丹明或在內(nèi)部區(qū)域或在所述3′端的黑洞淬滅基團(tuán)1[BHQ1]。

21.一種用于檢測(cè)乙型肝炎病毒的試劑盒，所述試劑盒包含SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2的雙重標(biāo)記的探針，單獨(dú)地或組合地；對(duì)應(yīng)引物對(duì)SEQ?ID?No.3、4和5、6，單獨(dú)地或組合地；以及擴(kuò)增試劑。

22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述擴(kuò)增試劑包括氯化鎂、Taq聚合酶和用于擴(kuò)增的緩沖液。