[發(fā)明專利]抗人EPO受體的抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080004518.2
• 申請日: 2010-01-13
• 公開（公告）號: CN102282174A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設計）人: M·雅爾斯;M·庫比斯;O·穆恩迪格爾;N·托萊斯-納格爾
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/44
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;隗永良

發(fā)明背景

人紅細胞生成素(EPO)是涉及祖紅細胞的增殖和分化的166-aa糖蛋白。這些細胞反應由人EPO受體(EPO-R)——508-aa糖蛋白——介導。人EPO受體(EPO-R)是508個氨基酸長度的蛋白質(Swiss?Prot?P19235)，其含有單個跨膜結構域且已被分類為I型細胞因子受體的生長激素亞家族成員。EPO-R在例如Winkelmann，J.C.等人，Blood?76(1990)24-30和Jones，S.S.等人，Blood?76(1990)31-35)中有描述。EPO-R的活化通過二聚化發(fā)生(Matthews，D.J.，PNAS?93(1996)9471-9476)。EPO-R包含8個細胞質酪氨酸位點，其在用EPO刺激后被磷酸化(Li，K.等人，J.Biol.Chem.278(2003)40702-40709；Wu，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA?94(1997)1806-1810)，導致“活化的EPO-R”。

抗EPO-R抗體記載于例如Andrea，A.D.，Blood?82(1993)46-52；Elliott，S.，Blood?107(2006)1892-1895；Kirkeby，A.，J.Nerosci.164(2007)50-58；Miura，O.，Arch.Biochem.306(1993)200-208；和EP?1?146?056，EP?1?327?681，EP?0?773?962，EP?0?776?370，US?2002/0031806，US?2003/0215444，US?2004/0058393，US?2004/0071694，US?2004/0175379，US?2005/0227289，US?2005/0244409，US?2006/0018902，US?6,998,124，US?7,053,184，US?7,081,523，WO?1995/005469，WO?1996/003438，WO?2000/061637，WO?2004/035603A2，WO?2005/100403A2。然而在目前已知的技術水平中，針對EPO-R的已知抗體不能夠區(qū)分非活化的和活化的EPO-R(見Jelkmann，W.等人，Crit.Rev.Onc/Hematol.67(2008)39-61；Li，K.等人，J.Biol.Chem.278(2003)40702-40709，和Wu，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA?94(1997)1806-1810)。

發(fā)明概述

本發(fā)明包含特異性結合活化的人EPO受體和區(qū)分非活化的和活化的EPO-R的抗體，其允許對EPO-R活化的特定分析，尤其是在來自人組織的細胞和活組織(biopsy)中。

本發(fā)明包含抗體，其特征在于特異性結合在第430位(下劃線)包含磷酸酪氨酰殘基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ?ID?NO：25)，在第461位(下劃線)包含磷酸酪氨酰殘基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ?ID?NO：26)，或在第465位(下劃線)包含磷酸酪氨酰殘基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ?ID?NO：26)人EPO受體片段。

編號涉及不含信號肽的UniProtKB/Swiss-Prot?P19235的EPO受體氨基酸序列。

根據本發(fā)明的抗體不結合在第430位沒有磷酸酪氨酰殘基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ?ID?NO：25)，在第461位沒有磷酸酪氨酰殘基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ?ID?NO：26)，或在第465位沒有磷酸酪氨酰殘基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ?ID?NO：26)EPO受體片段。

根據本發(fā)明的抗體在UT7細胞裂解物中特異性結合磷酸化的(活化的)EPO受體，所述細胞以100.000至500.000受體/細胞(EPO-R表達細胞)的量表達EPO-R并用500pM?EPO處理以活化。根據本發(fā)明的抗體在表達EPO受體但不用EPO處理的UT7細胞裂解物中不結合EPO受體。可通過蛋白質印跡測量這些結合。

優(yōu)選地本發(fā)明包含與人EPO-R結合的抗體，其特征在于包含SEQ?ID?NO：1，9或17的CDR3區(qū)作為重鏈可變結構域CDR3區(qū)。