[發明專利]用于鑒定細胞表面抗原的免疫結合劑的方法

有效

• 申請號: 201080003451.0
• 申請日: 2010-02-22
• 公開（公告）號: CN102239181A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發明（設計）人: V·胡爾曼-考提爾;D·厄里什
• 申請（專利權）人: 艾斯巴技術;愛爾康生物醫藥研究裝置有限責任公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N5/0781;C12N15/13;G01N33/537
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.用于鑒定特異性結合目的細胞表面抗原的免疫結合劑的方法，其包括：

(a)提供多個可操作地連接至第一可分選標記的表達免疫結合劑的細胞；

(b)提供多個可操作地連接至第二可分選標記的表達抗原的細胞，其中目的抗原展示在表達抗原的細胞的表面；

(c)將表達抗原的細胞與表達免疫結合劑的細胞接觸；和

(d)使用細胞分選器從多個表達免疫結合劑的細胞分離一個或多個能特異性結合表達抗原的細胞的表達免疫結合劑的細胞，其中所述第一和第二可分選標記在單個細胞復合物中的存在標示著表達免疫結合劑的細胞與表達抗原的細胞結合，從而鑒定了結合目的抗原的免疫結合劑。

2.權利要求1的方法，其還包括克隆性分離步驟(d)中獲得的表達免疫結合劑的細胞，然后任選地克隆性擴增所述克隆性分離的細胞。

3.權利要求2的方法，其還包括從分離的表達免疫結合劑的細胞獲得編碼免疫結合劑的核酸序列。

4.權利要求3的方法，其中通過PCR獲得所述編碼免疫結合劑的核酸序列。

5.權利要求4的方法，其中所述PCR是單細胞PCR。

6.權利要求2的方法，其還包括使分離的表達免疫結合劑的細胞經歷基于細胞的測定以功能性表征免疫結合劑。

7.權利要求6的方法，其中所述基于細胞的測定是CELISA。

8.權利要求1的方法，其中在抗原與B細胞受體之間形成細胞復合物。

9.前述權利要求的任一項的方法，其中免疫結合劑是抗體。

10.權利要求9的方法，其中所述抗體選自小鼠抗體、兔抗體、雞抗體、駱駝抗體、人抗體、人源化抗體和嵌合抗體。

11.權利要求9的方法，其中所述抗體選自全長免疫球蛋白、Fab、Dab和納米抗體。

12.權利要求9的方法，其中所述抗體是scFv。

13.前述權利要求的任一項的方法，其中從外源基因表達目的抗原。

14.前述權利要求的任一項的方法，其中所述目的抗原是經遺傳工程改造的抗原。

15.前述權利要求的任一項的方法，其中所述目的抗原是膜內在蛋白。

16.權利要求15的方法，其中所述膜內在蛋白是GPCR。

17.權利要求16的方法，其中所述GPCR選自CXCR2、CXCR1、CXCR3、CXCR4、CXCR6、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR8、CFTR、CIC-1、CIC-2、CIC-4、CIC-5、CIC-7、CIC-Ka、CIC-Kb、Bestrophins、TMEM16A、GABA受體、甘氨酸受體、ABC轉運蛋白、NAV1.1、NAV1.2、NAV1.3、NAV1.4、NAV1.5、NAV1.6、NAV1.7、NAV1.8、NAV1.9、1-磷酸鞘氨醇受體(S1P1R)和NMDA通道。

18.權利要求15的方法，其中所述膜內在蛋白是離子通道。

19.前述權利要求的任一項的方法，其中所述第一或第二可分選標記是熒光標記。

20.權利要求19的方法，其中所述熒光標記選自熒光蛋白、抗體/熒光綴合物和熒光細胞標記。

21.前述權利要求的任一項的方法，其中所述細胞分選器是熒光激活細胞分選器。

22.前述權利要求的任一項的方法，其中所述表達抗原的細胞是酵母細胞、酵母球芽或哺乳動物細胞。

23.權利要求22的方法，其中所述表達抗原的細胞是人細胞。

24.前述權利要求的任一項的方法，其中所述表達抗原的細胞表達外源抗原。

25.前述權利要求的任一項的方法，其中用表達載體轉染所述表達抗原的細胞。

26.前述權利要求的任一項的方法，其中所述表達免疫結合劑的細胞是酵母或哺乳動物細胞。

27.前述權利要求的任一項的方法，其中所述表達免疫結合劑的細胞是B細胞。