[發明專利]山核桃胚根不定芽誘導和生根培養基及組培方法

無效

• 申請號: 201019146041.0
• 申請日: 2010-02-05
• 公開（公告）號: CN101785432A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 張啟香;黃堅欽;王正加;黃有軍;胡恒康
• 申請（專利權）人: 浙江林學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明涉及一種以山核桃幼胚為外植體，發育形成胚根，繼 而形成不定芽、誘導生根的培養基及組培方法。

背景技術

山核桃(Carya?cathayensis?Sarg.)是胡桃科山核桃屬的果、 木兼用的優良經濟樹種，在自然環境下，山核桃靠種子繁殖。山 核桃干果可加工成各種特色風味食品、保健品，山核桃含油率高 達70％～74％，富含不飽和脂肪酸，含粗蛋白7.8％～9.6％和含K、 Ca、Mg、Na等人體所必須的礦質元素。山核桃木質堅硬、紋 理美、抗腐蝕，在軍工、船舶和建筑業用途廣泛，是我國一種十 分優良的經濟樹種。但山核桃樹的分布區域狹窄，為我國的特有 樹種，且只有浙江西北山地和交界的皖南山地有所分布。需求旺、 產品少的矛盾突出。長期以來，山核桃的繁殖主要是實生和嫁接 繁殖，實生繁殖難以保持品種的優良特性。山核桃又因富含單寧， 切口極易氧化褐變，對嫁接的技術要求較高，而且嫁接又要受季 節和氣候的限制，繁殖速度難以滿足生產發展的需求。

林學界，眾多學者對山核桃的繁殖作了許多新的探索和嘗 試，如黃有軍先生的幼樹的根插繁殖技術、裴東等先生對核桃的 試管嫩莖生根技術及幼樹的根插繁殖技術等，各對社會作出了有 益的貢獻。經檢索，至今未發現通過山核桃幼胚經試管培育不定 芽并繁殖生根育成植株的相關報道。

發明內容

針對山核桃樹種的經濟價值越來越被人們認識，發展山核桃 生產的熱情自發涌動，依靠傳統的實生繁殖和嫁接繁殖，從質量 和數量上均無法滿足現實的需求，為此，本發明要解決的技術問 題是提供一種以山核桃幼胚為外植體，誘導胚根發育、不定芽形 成和不定芽生根的培養基及組培方法。

本發明的技術問題通過如下技術方案解決：

1.本山核桃胚根不定芽誘導和生根培養基，包括不同誘導時 期的四種培養基，各種培養基的原料及其附加量分別是：

(1)初代培養基：以MS為基本培養基，附加蔗糖20～30g/L、 Agar?type?A即瓊脂A?6.5～8.5g/L，培養基的pH值為5.7；

(2)胚根不定芽誘導培養基：MS附加蔗糖20～30g/L、瓊脂 A?6.5～8.5g/L、Picloram即4-氨基-3，5，6-三氯吡啶羧酸 0.01mg/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L，pH值5.7；

(3)不定芽增殖培養基：MS附加蔗糖20～30g/L、瓊脂A 6.5～8.5g/L、Picloram0.01～0.02mg/L、6-BA1～2mg/L，pH值為5.7；

(4)不定芽生根培養基：MS附加蔗糖20～30g/L，瓊脂A 6.5～8.5g/L、IAA即吲哚乙酸0.3～0.8mg/L，pH值5.7。

用上述的培養基進行山核桃胚根不定芽誘導及生根的組培 方法經過下列步驟：

(1)外植體采集與消毒：選取健壯的山核桃開花后100～120 天所結的幼果，依次進行自來水沖洗2h，超凈工作臺上用75％ 乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3～4次，濃度為0.525％的NaClO 滅菌20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表 面水分，并剝去革質果皮，取出幼胚待用；

(2)初代培養：將步驟(1)無菌條件下取出的幼胚接入前述 的初代培養基中，每天轉接1次；3天后改為每3天轉接一次， 每次均轉接至相同的新鮮培養基中，共轉接三次，其中前7天置 于暗柜中培養，后5天置于光暗周期為光16h/暗8h的條件下培 養。培養溫度為25±2℃；

(3)胚根不定芽誘導：將初代培養后胚根發育良好的幼胚接 入前述的胚根不定芽誘導培養基中，經過30d的誘導，獲得不定 芽。微電腦時控開關控制培養室每日光照時間，每日光暗周期為 光16h/暗8h，光照強度為40～50μmol?m^-2s^-1，培養溫度為25±2℃；

(4)不定芽增殖培養：將獲得的不定芽在前述的不定芽增殖 培養基上進行增殖培養，30天繼代1次，共繼代3次，增殖系 數為5～8。光照培養，光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為 40～50μmol?m^-2s^-1，培養溫度為25±2℃；