[發明專利]山核桃胚根不定芽誘導和生根培養基及組培方法

無效

• 申請號: 201019146041.0
• 申請日: 2010-02-05
• 公開（公告）號: CN101785432A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 張啟香;黃堅欽;王正加;黃有軍;胡恒康
• 申請（專利權）人: 浙江林學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

1.一種山核桃胚根不定芽誘導和生根培養基，其特征是包括不同誘導時期的四種培養基，各種培養基的原料及其附加量分別是：

(1)初代培養基：以MS為基本培養基，附加蔗糖20～30g/L、Agar?type?A即瓊脂A?6.5～8.5g/L，培養基的pH值為5.7；

(2)胚根不定芽誘導培養基：MS附加蔗糖20～30g/L、瓊脂A?6.5～8.5g/L、Picloram即4-氨基-3，5，6-三氯吡啶羧酸0.01mg/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L，pH值5.7；

(3)不定芽增殖培養基：MS附加蔗糖20～30g/L、瓊脂A6.5～8.5g/L、Picloram0.01～0.02mg/L、6-BA1～2mg/L，pH值為5.7；

(4)不定芽生根培養基：MS附加蔗糖20～30g/L，瓊脂A6.5～8.5g/L、IAA即吲哚乙酸0.3～0.8mg/L，pH值5.7。

2.一種用權利要求1所述的培養基進行山核桃胚根不定芽誘導及生根的組培方法，其特征是經過下列步驟：

(1)外植體采集與消毒：選取健壯的山核桃開花后100～120天所結的幼果，依次進行自來水沖洗2h，超凈工作臺上用75％乙醇滅菌3min，無菌水沖洗3～4次，濃度為0.525％的NaClO滅菌20min并抽真空，無菌水沖洗5次后，用滅菌濾紙吸干表面水分，并剝去革質果皮，取出幼胚待用；?

(2)初代培養：將步驟(1)無菌條件下取出的幼胚接入前述的初代培養基中，每天轉接1次；3天后改為每3天轉接一次，每次均轉接至相同的新鮮培養基中，共轉接三次，其中前7天置于暗柜中培養，后5天置于光暗周期為光16h/暗8h的條件下培養，培養溫度為25±2℃；

(3)胚根不定芽誘導：將初代培養后胚根發育良好的幼胚接入前述的胚根不定芽誘導培養基中，經過30d的誘導，獲得不定芽，微電腦時控開關控制培養室每日光照時間，每日光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40～50μmol?m^-2s^-1，培養溫度為25±2℃；

(4)不定芽增殖培養：將獲得的不定芽在前述的不定芽增殖培養基上進行增殖培養，30天繼代1次，共繼代3次，增殖系數為5～8，光照培養，光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40～50μmol?m^-2s^-1，培養溫度為25±2℃；

(5)生根誘導：前述的不定芽在生根培養基中誘導生根，培養30天，生根率達50％，光照培養，光暗周期為光16h/暗8h，光照強度為40～50μmol?m^-2s^-1，培養溫度為25±1℃。?