[發明專利]全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的新技術

無效

• 申請號: 201019026027.7
• 申請日: 2010-02-04
• 公開（公告）號: CN101768617A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發明（設計）人: 應漢杰;姚月蘭;熊健;陳勇;柏建新;苑巍;張磊
• 申請（專利權）人: 南京工業大學;南京同凱兆業生物技術有限責任公司
• 主分類號: C12P19/40
• 分類號: C12P19/40;C12R1/645;C12R1/85;C12R1/84;C12R1/78
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于以脫氧核苷一磷酸和 磷酸根離子為底物，以糖為能量供體，利用有透性的酵母細胞，在化學效應物質的存在 下建立高效的能量自耦聯和再生系統來制備脫氧核苷三磷酸；

其中，所述的化學效應物質是指金屬離子和有機化合物的組合；所述的金屬離子為 Mg²⁺和K⁺中的任意一種或兩種的組合；所述的有機化合物為乙醛和多元醇的混合物、 或乙醛；Mg²⁺起始反應濃度為1～100mM，K⁺起始反應濃度為1～100mM，Na⁺起始反應 濃度為1～100mM，乙醛起始反應濃度為10～80mL/L，多元醇起始反應濃度為5～100mL/L；

所述的有透性的酵母細胞是指通過化學、物理或生物方法處理過的細胞膜的通透性 改變過的酵母細胞。

2.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的脫氧核苷三磷酸是指脫氧腺苷三磷酸dATP、脫氧鳥苷三磷酸dGTP、脫氧胞苷三磷 酸dCTP和脫氧胸苷三磷酸dTTP中的任意一種，其結構式如下：

3.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的脫氧核苷一磷酸是指脫氧腺苷一磷酸dAMP、脫氧鳥苷一磷酸dGMP、脫氧胞苷一 磷酸dCMP、和脫氧胸苷一磷酸dTMP中的任意一種，其結構式如下：

4.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的脫氧核苷一磷酸的起始反應濃度為1～100mM；所述磷酸根離子起始反應濃度為 0.01～1.0M；糖的起始反應濃度為0.1～1.0M；所述的糖為葡萄糖、果糖、蔗糖或麥芽糖。

5.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的多元醇為乙二醇、丙三醇、山梨醇或甘露醇。

6.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的酵母細胞為酵母屬、假絲酵母屬、畢赤酵母屬、球擬酵母屬、德巴利酵母屬、接合 酵母屬、克魯維酵母屬、漢遜酵母屬和酒香酵母屬中的任意一種，酵母的使用量為按濕 菌體計100～800g/L。

7.根據權利要求6所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的酵母細胞為釀酒酵母、近平滑假絲酵母、面包酵母、奧默列氏畢赤酵母、白色球擬 酵母、類球形德巴利酵母、魯氏接合酵母、馬克斯克魯維酵母、杰丁漢遜酵母或異酒香 酵母。

8.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于， 所述化學、物理或生物方法為表面活性劑法、有機溶劑法、凍融法、超聲波處理法、風 干法或冷凍干燥法。

9.根據權利要求8所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的表面活性劑法中使用的表面活性劑為非離子型表面活性劑、陽離子型表面活性劑或 陰離子表面活性劑，使用濃度為0.1～50g/L。

10.根據權利要求8所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述的有機溶劑法中使用的有機溶劑為二甲苯、甲苯、脂肪酶、丙酮或乙酸乙酯，使用濃 度為0.1～50ml/L。

11.根據權利要求1所述的全細胞生物合成脫氧核苷三磷酸的方法，其特征在于所 述制備脫氧核苷三磷酸的反應在水溶液中進行，在pH?5.0～9.0、20～50℃條件下反應2～24 小時。