[發明專利]一種腦膜炎球菌多糖結合物中游離多糖含量的測定方法無效
| 申請號： | 201010623626.X | 申請日： | 2010-12-30 |
| 公開（公告）號： | CN102175841A | 公開（公告）日： | 2011-09-07 |
| 發明（設計）人： | 王婷婷;魏文進;何佳琦 | 申請（專利權）人： | 北京民海生物科技有限公司;深圳康泰生物制品股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/48 | 分類號： | G01N33/48 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加嶺;張慶敏 |
| 地址： | 102600 北京市中關村*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 腦膜炎 球菌 多糖 結合 游離 含量 測定 方法 | ||
1.一種腦膜炎球菌多糖結合物中游離多糖含量的測定方法，包括取樣、離心、計算多糖濃度、計算游離多糖含量，其特征在于，離心時在腦膜炎球菌多糖結合物和待測的腦膜炎球菌多糖結合物對應的衍生物中加入脫氧膽酸鈉溶液。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，該腦膜炎球菌多糖結合物選自A群、C群、W135群或Y群。
3.根據權利要求2所述的A群腦膜炎球菌多糖結合物中游離多糖含量的測定方法，包括以下步驟：
1)取樣：取待檢腦膜炎球菌多糖結合物1ml作為樣1，取待檢腦膜炎球菌多糖結合物對應的衍生物溶液1ml作為樣3；
2)離心：另取腦膜炎球菌多糖結合物1ml置于1.5ml離心管中，取待檢腦膜炎球菌多糖結合物對應的衍生物溶液1ml置于另一1.5ml離心管中；向每離心管加入100μl1％的脫氧膽酸鈉溶液，冰浴保持30分鐘，后加入0.5M鹽酸溶液25μl，充分振蕩，5000～6000rpm離心15～20分鐘，每離心管單獨收集上清液1ml，其中結合物上清液為樣2，衍生物上清液為樣4；
3)計算多糖濃度：A群腦膜炎球菌多糖結合物測定磷含量，按照“A群多糖濃度＝磷含量/0.08”，計算樣1、樣2、樣3、樣4的多糖濃度C1、C2、C3、C4；
4)計算游離多糖含量：其中P為回收率，H為游離多糖含量
4.根據權利要求2所述的C群腦膜炎球菌多糖結合物中游離多糖含量的測定方法，包括以下步驟：
1)取樣：取待檢腦膜炎球菌多糖結合物1ml作為樣1，取待檢腦膜炎球菌多糖結合物對應的衍生物溶液1ml作為樣3；
2)離心：另取腦膜炎球菌多糖結合物1ml置于1.5ml離心管中，取待檢腦膜炎球菌多糖結合物對應的衍生物溶液1ml置于另一1.5ml離心管中；向每離心管加入100μl?1％的脫氧膽酸鈉溶液，冰浴保持30分鐘，后加入0.5M鹽酸溶液25μl，充分振蕩，5000～6000rpm離心15～20分鐘，每離心管單獨收集上清液1ml，其中結合物上清液為樣2，衍生物上清液為樣4；
3)計算多糖濃度：C群腦膜炎球菌多糖結合物測定唾液酸含量，按照“C群多糖濃度＝唾液酸含量/0.8”，計算樣1、樣2、樣3、樣4的多糖濃度C1、C2、C3、C4；
4)計算游離多糖含量：其中P為回收率，H為游離多糖含量
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