[發明專利]一種細胞凍存方法有效
| 申請號： | 201010622260.4 | 申請日： | 2010-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN102140433A | 公開（公告）日： | 2011-08-03 |
| 發明（設計）人： | 林登宇;徐希麗 | 申請（專利權）人： | 北京民海生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/07 | 分類號： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加嶺;張慶敏 |
| 地址： | 102600 北京市中關村*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種細胞凍存方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：
將生長成單層的培養細胞用胰酶消化1～8min，棄掉胰酶，按照培養瓶培養面積加入0.08～0.1ml/cm2的細胞凍存液，吹打混勻細胞懸液，分裝入潔凈的凍存管；
將凍存管于2～8℃放置10～40min，然后把凍存管于-80℃放置10～20h，浸入液氮中進行長期保存。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生長成單層的培養細胞的細胞密度為5.5×104～6.5×104/cm2。
3.根據權利要求1所述的方法，所述用于消化細胞的胰酶的質量體積比為0.15～0.40％。
4.根據權利要求3所述的方法，所述用于消化細胞的胰酶的質量體積比為0.25％。
5.據權利要求1所述的方法，所述胰酶消化時間為2min。
6.根據權利要求1所述的方法，所述裝有細胞懸液的凍存管于2～8℃放置20min。
7.根據權利要求1所述的方法，所述培養細胞為VERO、BHK-21、MRC-5、2BS或KMB17細胞。
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