[發明專利]羅漢果甜苷V半抗原和人工抗原及其制備方法

無效

• 申請號: 201010617287.4
• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102153612A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 段小群;楊新平;李勇文;李麗;盧曦;陳旭;李芳耀;林家遜
• 申請（專利權）人: 桂林醫學院
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00;C07K14/765;C07K1/113
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 羅玉榮

1.一種羅漢果甜苷V半抗原，其特征是：以羅漢果甜苷V為原料，應用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應生成羅漢果甜苷V丁二酸單酯制得，其結構式為：

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2.一種羅漢果甜苷V半抗原的制備方法，其特征是：該方法包括如下步驟：

（1）取羅漢果甜苷V、丁二酸酐投入反應瓶中，加入新蒸餾的吡啶，攪拌溶解，加入適量的4-二甲基氨基吡啶（DMAP），于室溫下反應；

（2）用TLC監測反應進度，反應結束，得到反應液；

（3）取反應液用氯仿和甲醇制備薄層，得油狀純羅漢果甜苷V-HS半抗原，置于4℃冰箱保存，所述氯仿與甲醇的體積比為V_氯仿∶V_甲醇=1∶1。

3.一種羅漢果甜苷?V-HS-BSA人工抗原，其特征是：以羅漢果甜苷V為原料，應用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應生成羅漢果甜苷V丁二酸單酯制得，用紅外光譜和紫外光譜確定半抗原的結構；人工半抗原不分離，在堿性條件下，使之與牛血清蛋白-BSA結合制得，其結構式為：

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4.一種羅漢果甜苷?V-HS-BSA人工抗原的制備方法，其特征是：該方法包括如下步驟：

1）取羅漢果甜苷V、丁二酸酐投入反應瓶中，加入新蒸餾吡啶，攪拌溶解，加入適量的4-二甲基氨基吡啶，于室溫下反應；

2）用TLC監測反應進度，反應結束，得到反應液；

3）?取步驟2）的反應液，不分離，加入適量N,N-二環己基碳二酰亞胺，攪拌反應；

4）攪拌下滴加BSA-碳酸緩沖液，加完后繼續反應，反應中用碳酸緩沖液調pH值為9，于室溫反應5小時；

5）反應液過濾，濾液裝入透析袋，用超純水于4℃透析，每5小時換水一次，透析3天，經冷凍干燥，得偶聯產物為羅漢果甜苷V-HS-BSA人工抗原，置于-20℃下保存。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征是：步驟4）所述BSA-碳酸緩沖液是將10mgBSA溶于1mlNa₂CO₃-NaHCO₃緩沖液。

6.一種羅漢果甜苷?V-HS-HSA人工抗原，其特征是：以羅漢果甜苷V為原料，應用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應生成羅漢果甜苷V丁二酸單酯制得，用紅外光譜和紫外光譜確定半抗原的結構；人工半抗原不分離，在堿性條件下，使之與人血清蛋白-HAS結合制得，其結構式為：

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7.一種羅漢果甜苷?V-HS-HSA人工抗原的制備方法，其特征是：該方法包括如下步驟：

1）取羅漢果甜苷V、丁二酸酐投入反應瓶中，加入新蒸餾吡啶，攪拌溶解，加入適量的4-二甲基氨基吡啶，于室溫下反應；

2）用TLC監測反應進度，反應結束，得到反應液；

3）?取步驟2）的反應液，不分離，加入適量N,N-二環己基碳二酰亞胺，攪拌反應10min；

4）攪拌下滴加HSA-碳酸緩沖液，加完后繼續反應，反應中用碳酸緩沖液調pH值為9，于室溫反應5小時；

5）反應液過濾，濾液裝入透析袋，用超純水于4℃透析，每5小時換水一次，透析3天，經冷凍干燥，得羅漢果甜苷V-HS-HSA人工抗原，置于-20℃下保存。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征是：步驟4）所述HAS-碳酸緩沖液是將10mgHSA溶于1mlNa₂CO₃-NaHCO₃緩沖液。