[發明專利]一種改進的研究蛋白互作的雙分子熒光互補載體

無效

• 申請號: 201010617212.6
• 申請日: 2010-12-28
• 公開（公告）號: CN102168102A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 王長春;馮采芬;楊莉;宋凱;趙奕銘;王偉;楊玲;俞盼盼;李茶姿;王鋒青
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所 33230
• 代理人: 陳輝

1.一種用于研究蛋白互作的雙分子熒光互補載體，其特征在于，該載體包括CaMV?35S啟動子和CaMV?35S終止，在CaMV?35S啟動子和CaMV?35S終止子之間包括cEYFP盒或nEYFP盒。

2.根據權利要求1所述的載體，其特征在于，在cEYFP盒或nEYFP盒前插入有正向的CaMV35S啟動子，在cEYFP盒或nEYFP盒后插入正向的CaMV?35S終止子。

3.根據權利要求2所述的載體，其特征在于，該載體包括如下結構：EcoRI-XbaI-正向的CaMV?35S啟動子-cEYFP盒或nEYFP盒-SalI-KpnI-BamHI-CaMV?35S終止子。

4.根據權利要求3或1所述的載體，其特征在于，該載體包括如下結構：EcoRI-XbaI-正向的2個CaMV?35S啟動子-nEYFP盒-SalI-KpnI-BamHI-CaMV?35S終止子；和EcoRI-XbaI-正向的2個CaMV?35S啟動子-cEYFP盒-pstI-SalI-KpnI-BamHI-CaMV?35S終止子-HindIII。

5.根據權利要求1-4之一所述的載體，其特征在于，CaMV?35S終止子的序列包括SQ：1。

6.根據權利要求1-4之一所述的載體，其特征在于，cEYFP盒的序列包括SQ：4；nEYFP盒包括SQ：2。

7.根據權利要求1-4之一所述的載體，其特征在于，所述的分子為蛋白分子。

8.一種構件用于研究雙分子熒光互補的載體的方法，包括：

(1)、提供基礎載體pCAMBIA1301，將CaMV35s終止子通過Hind?III/Xba?I插入到pCAMBIA1301的多克隆位點，從而消除了位于Hind?III和Xba?I間的酶切位點，消除的酶切位點為Sal?I、Pst?I和Sph?I；

(2)、用Xba?I和EcoR?I雙酶切步驟(1)中獲得的pCAMBIA1301-CaMV35s終止子載體，Xba?I單酶切cEYFP盒-pMD18-T或nEYFP盒-pMD18-T，回收上述兩種酶切產物；并將酶切產物進行粘性末端補平；

(3)、通過cEYFP盒或nEYFP盒連接至補平的pCAMBIA1301-終止子載體中，借此消除了pCAMBIA1301-35s?terminator?MCS上位于Xba?I和EcoR?I之間的酶切位點，包括BamH?I、Sma?I、Kpn?I、Sac?I、Ban?II等酶切位點，同時也產生了Xba?I和EcoR?I酶切位點，挑取正向連接的克隆。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，CaMV?35S終止子的序列包括SQ：1。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，cEYFP盒的序列包括cEYFP盒的序列包括SQ：4；nEYFP盒包括SQ：2。