[發明專利]叢枝菌根真菌孢子的表面消毒方法

無效

• 申請號: 201010617136.9
• 申請日: 2010-12-30
• 公開（公告）號: CN102166367A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 唐明;孫學廣;陳輝
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A61L2/18
• 分類號: A61L2/18;A01N47/44;A01P1/00;A01N37/20;A01N43/16;A01N43/80;A61L101/36;A61L101/32;A61L101/48
• 代理公司: 西安集思得知識產權代理有限公司 61210
• 代理人: 張晉吉

1.叢枝菌根真菌孢子的表面消毒方法，其特征在于：是通過以下技術方法實現的：

1.a.取兩張濾紙將其邊緣上折后鋪入其中一個培養皿內，裁剪一些吸水紙放入其它幾個培養皿內，另留二個空培養皿不放濾紙與吸水紙，將培養皿包嚴，備用蒸餾水，對培養皿和蒸餾水進行高壓蒸汽滅菌；

1.b.配制含有氯胺T、氯霉素、硫酸慶大霉素、硫酸鏈霉素和吐溫-20共5種試劑的孢子表面消毒液，將消毒液通過微孔濾膜過濾除菌；

1.c.打開裝有雙層濾紙的培養皿，將載有AMF孢子的濾紙片放入培養皿內的雙層濾紙中間，用膠頭滴管吸取消毒液滴加在上層濾紙上，使整個雙層濾紙浸透并在上層可見消毒液，將培養皿封蓋；

1.d.消毒過程中如需更換消毒液，可通過轉移雙層濾紙至裝有吸水紙的培養皿內吸取消毒液，再轉至另一套空培養皿中重新添加消毒液；

1.e.在消毒完成后，將雙層濾紙轉移到裝有吸水紙的培養皿中，用吸水紙吸取雙層濾紙所吸附的消毒液；

1.f.轉移雙層濾紙至裝有吸水紙的另一培養皿中，用膠頭滴管在上層濾紙中添加無菌水，利用吸水紙吸取水分，重復操作3-5次；

1.g.取出上層濾紙并倒置放入另一培養皿中，解剖鏡下分別檢查并轉移上層濾紙、下層濾紙和濾紙片上的AMF孢子，AMF孢子的表面消毒完成。

2.根據權利要求1所述的叢枝菌根真菌孢子的表面消毒方法，其特征在于：是通過以下技術方法實現的：

2.a.備用10套60mm的玻璃培養皿、直徑為75mm的普通濾紙和吸水紙，取兩張濾紙將其邊緣上折后鋪入培養皿底，其上折的邊緣與培養皿壁留有空隙以便轉移，裁剪一些吸水紙，大小剛好放入培養皿底，4張一組放入培養皿內，共放置7套培養皿，另留二套空培養皿以備轉移雙層濾紙，將培養皿包嚴，備用200ml蒸餾水和2支膠頭滴管，對培養皿、蒸餾水和膠頭滴管在121℃下高壓蒸汽滅菌20min；

2.b.配制含有50g/L氯胺T、50mg/L氯霉素、100mg/L硫酸慶大霉素、200mg/L硫酸鏈霉素和0.05％吐溫-20的孢子表面消毒液20mL，將消毒液通過0.22μm孔徑的微孔濾膜過濾除菌；

2.c.整個孢子表面消毒過程在室溫條件下，放置于超凈工作臺上進行，打開裝有雙層濾紙的培養皿，將載有孢子的濾紙片放入培養皿內的兩層濾紙正中，用膠頭滴管吸取消毒液從一側開始滴加在雙層濾紙的上層濾紙上，使整個雙層濾紙浸透并在上層可見消毒液，封蓋培養皿，消毒液滴加過程中避免產生氣泡；

2.d.消毒過程中如需更換消毒液，可通過轉移雙層濾紙至裝有吸水紙的培養皿內吸走消毒液，再轉至另一套空培養皿中重新添加消毒液來實現；

2.e.消毒時間為15min，消毒完成后，將雙層濾紙轉移到裝有吸水紙的培養皿中，用吸水紙吸取濾紙吸附的消毒液；

2.f.轉移雙層濾紙至裝有吸水紙的另一培養皿中，用另一個膠頭滴管在上層濾紙表面添加無菌水，利用吸水紙從下層濾紙吸收水分，重復操作5次；

2.g.取出上層濾紙并倒置放入另一套培養皿內，解剖鏡下分別檢查并轉移上層濾紙、下層濾紙及濾紙片上的AMF孢子，AMF孢子的表面消毒完成。