[發明專利]真菌單個孢子的分離方法

無效

• 申請號: 201010617115.7
• 申請日: 2010-12-30
• 公開（公告）號: CN102140432A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 唐明;孫學廣;陳輝
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00
• 代理公司: 西安集思得知識產權代理有限公司 61210
• 代理人: 張晉吉

1.真菌單個孢子的分離方法，其特征在于：是通過以下方法實現的：

1.a.根據待分離孢子的大小選擇內徑在0.02-1mm之間長度為100mm的硬質中性玻璃毛細管，同時備用尖端細長帶膠頭的玻璃巴斯德吸管以及普通載玻片和蒸餾水，將上述設備及蒸餾水進行高壓蒸汽滅菌；

1.b.將玻璃毛細管從尖端插入巴斯德吸管中，留一段在巴斯德吸管外，用Parafilm封口膜將巴斯德吸管尖端管口處封閉；

1.c.用解剖針挑取部分待分離的真菌材料，真菌病害病斑組織或大型真菌菌褶或真菌菌落，置于已消毒的載玻片上，滴加無菌水分散孢子，在復式顯微鏡或解剖鏡下，調整視野使單個孢子清晰可見；

1.d.將巴斯德吸管的膠頭捏下并保持不動，在復式顯微鏡或解剖鏡下，將毛細管管口接近待分離的單個孢子，并使毛細管管口中心正對并接近孢子，松動膠頭，將孢子吸入毛細管中，保持膠頭不動；

1.e.取備用的培養基，轉移孢子至培養基上方，捏下膠頭將孢子吹到培養基表面，操作過程中如有污染，便更換玻璃毛細管，操作結束后拆卸玻璃毛細管，將巴斯德吸管與毛細管分別保存，真菌單個孢子的分離完成，培養基選用PDA培養基或SDA培養基或MEA培養基或選擇培養基。

2.根據權利要求1所述的真菌單個孢子的分離方法，其特征在于：是通過以下方法實現的：

2.a.根據待分離的孢子大小備用內徑為0.1mm、長度為100mm的硬質中性玻璃毛細管若干根，尖端細長帶膠頭的玻璃巴斯德吸管一支，25.4×76.2mm的普通載玻片和20ml蒸餾水，將上述設備及蒸餾水在121℃下高壓蒸汽滅菌20min；

2.b.將玻璃毛細管從尖端插入巴斯德吸管中，留20mm長度在吸管外，用Parafilm封口膜將吸管尖端管口處封閉；

2.c.取一支解剖針，在酒精燈火焰上將針頭燒紅滅菌，待解剖針冷卻后，挑取部分待分離的真菌材料，選取鏈格孢菌落和青霉菌落，置于已消毒的載玻片上，滴加一滴無菌水使孢子分散開，在復式顯微鏡或解剖鏡下，調整視野使單個孢子清晰可見；

2.d.單手持巴斯德吸管和玻璃毛細管，拇指和食指捏巴斯德吸管膠頭，中指和無名指夾持吸管的下端，手指不要接觸毛細管，將巴斯德吸管的膠頭捏下并保持不動，在復式顯微鏡或解剖鏡下，將毛細管管口接近待分離的單個孢子，并使管口中心正對并接近孢子，松動膠頭，將單個孢子吸入毛細管中，保持膠頭不動，注意不要使孢子進入吸管內；

2.e.取備用的PDA培養基，手持巴斯德吸管和玻璃毛細管轉移孢子至PDA培養基上方，捏下膠頭將孢子吹到PDA培養基表面，操作過程中如有污染，便更換玻璃毛細管，操作結束后拆卸玻璃毛細管，將巴斯德吸管與毛細管分別保存，真菌單個孢子的分離完成。