[發明專利]微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法

無效

• 申請號: 201010613258.0
• 申請日: 2010-12-30
• 公開（公告）號: CN102146427A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 潘風光;李洪山;劉靜波;趙婭婭;吳涵;秦亞楠;方珍
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬快速制備豬血活性肽的一種方法，屬于畜禽副產品深加工及綜合利用的技術領域。

背景技術

我國豬血資源豐富，但豬血在我國浪費現象嚴重。目前粗加工成血粉或者血豆腐，精深加工主要集中在生產血紅素、SOD和補鐵產品等。豬血中蛋白含量高，可生產加工活性肽產品。活性肽不僅具有營養功能和生物活性，而且還具有被腸道快速吸收的特點。目前工業生產的蛋白粉主要是采用酸堿法或酶解法，但是使用酸堿法會使氨基酸營養價值降低，而采用酶解法，酶解過程需要十多小時甚至更長時間。微波在焙烤、干燥、燙漂、解凍方面都有應用，在輔助酶解上的研究也越來越多。微波輔助酶解可大大縮短酶解時間，提高生產效率，便于工業化生產。

發明內容

本發明目的是提供一種微波輔助酶解豬血蛋白，生產活性肽的方法。該方法工藝簡單，酶解反應時間短。所述方法包括：豬血抗凝，離心分離，超聲波破壁，微波輔助酶解，二次酶解，滅酶，膜過濾，噴霧干燥。

1)檢疫合格的新鮮豬血液加入0.3％-0.5％檸檬酸三鈉抗凝；

2)豬血離心分離：離心使用高速冷凍離心機，離心溫度1℃-4℃，離心轉速2500rpm-4000rpm，離心時間15min-20min，離心后，血細胞加入同體積0.9％生理鹽水沖洗1-3次；

3)超聲波破胞：超聲波功率為200w-400w，時間為10min-20min，間歇比采用2∶1、1∶1、1∶2，操作在常溫下進行；

4)微波輔助酶解：微波輔助第一次酶解，微波功率在500w-700w，溫度在45℃-60℃，酶解的時間為10min-20min，底物濃度為7％-10％，用1M的NaOH調節pH至8.0-10.0，再加入pH為8.0-10.0的磷酸鹽緩沖液，加入酶活力為2.4AU-A/g的Alcalase內切酶，酶的添加量為底物的2％-7％；

5)二次酶解：在第一次酶解結束后，再加入酶活力為200000U/g食品級風味蛋白酶進行第二次酶解，加酶量為底物的2％，酶解1min-3min，微波功率和溫度與第一次酶解相同，脫去苦味；

6)滅酶：在90℃-100℃水浴鍋內滅酶，滅酶時間為5min-10m；

7)膜過濾：采用孔徑為3000Da-10000Da的膜，對酶解液進行過濾，濾除大分子物質；

8)噴霧干燥：噴霧干燥料液流量6L/h-8L/h，料液溫度75℃-85℃，進風口溫度在120℃-140℃，出口風溫度在70℃-85℃，噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。

具體實施方式

實施例

1血細胞的分離

檢疫合格的新鮮豬血加入0.33％檸檬酸三鈉抗凝，緩慢攪拌。使用高速冷凍離心機分離血液，在4℃條件下，用3000rpm的轉速離心15min，倒出上清液，加入等體積0.9％生理鹽水再次離心，上述清洗步驟重復兩次，得到較純凈的血細胞。

2超聲波破壁

用超聲波破除血細胞的細胞壁，調整功率為400w，間歇比2∶1，加兩倍體積去離子水，超聲波處理20min。破壁操作在常溫下進行。用紫外-可見分光光度計測量上述溶液，吸光度從0.102上升到0.408，破壁效果顯著。

3微波輔助酶解

微波輔助酶解采用分步酶解的方法。超聲波破壁后的底物加入蒸餾水調成濃度7％的溶液，用1M的NaOH調節底物pH至9.0，再加入pH為9.0的磷酸鹽緩沖液，添加酶活力為2.4AU-A/g的Alcalase內切酶，加酶量為底物的6％。將配好的酶解反應溶液倒入到微波反應儀，設定微波功率為500w，控制溫度在50℃，酶解11min后，酶解效率能達到29.74％。再加入2％酶活力為200000U/g的食品級風味蛋白酶進行二次酶解，酶解2min，脫去苦味。在酶解反應完成后，用90℃水浴鍋恒溫10min滅酶。最后將酶解液用3000Da膜過濾，濾除大分子物質。用高效液相色譜分析濾液，80％以上是小于1000Da的活性肽。

4噴霧干燥

膜過濾后的酶解液進行噴霧干燥，料液流量為6.5L/h，料液溫度為80℃，進風口溫度為130℃，出風口溫度為75℃，噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。