[發明專利]一種艾滋病檢測質控血清的配制方法

有效

• 申請號: 201010611312.8
• 申請日: 2010-12-29
• 公開（公告）號: CN102128927A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 朱紅;劉建禮;張紹福
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: G01N33/571
• 分類號: G01N33/571
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術領域

本發明屬于醫學檢驗領域。具體涉及一種艾滋病檢測質控血清的配制方法。

背景技術

艾滋病是嚴重危害人類健康的超級瘟疫，它是由人類免疫缺陷病毒（HIV）引起的。目前艾滋病的檢測使用最廣泛的方法是酶聯免疫吸附實驗（ELISA）。但是，ELISA法在實際中受很多因素影響,易導致檢測結果出現偏差,為了提高每次實驗的準確性,在HIV檢測過程中需要設立質控對照，通過對質控血清的檢測值的變化進行監測，從而判斷每次實驗的可靠性和重復性。因此，質控血清的質量和準確性是保證艾滋病檢測可靠性的關鍵技術環節。

目前HIV檢測中使用的質控對照通常為臨界值質控血清，這種血清很難從臨床直接獲得，因此，一般采用HIV強陽性血清進行稀釋配制。配制的方法一般為：通過反復稀釋，并進行檢測其S/CO值(檢測吸光度S與檢測限cutoff的比值)，直到其S/CO值達到預定值左右。由于ELISA方法在S/CO值達到預定值時具有極高的敏感性，因此這種方法的弊端就是需要反復進行摸索稀釋倍數和進行檢測，直到其檢測值恰巧可以落在想要的范圍內。需要耗費很多的時間、人力和檢測費用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種艾滋病檢測質控血清的配制方法。該方法簡單易行，減少步驟和各種損耗，并且減少反復摸索稀釋的盲目性和不可控性。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：

通過大量檢測實驗數據和數學模型分析，本發明人得出了以下結論：（1）臨床獲得的HIV強陽性血清的檢測信號值遠遠超出了現有常規ELISA定性檢測方法和儀器的上限，需要進行千倍以上的稀釋才能進入檢測信號有效區間。（2）當取反應OD值（樣本檢測OD值-陰性對照OD值）作為反應信號代替S/CO值時，在一定范圍內，反應OD值與血清待檢靶物質的濃度具有良好的線性回歸關系，其回歸曲線是一條截距近似為0的直線，可以統一表示為“Y=aX”其中Y代表反應OD值，X代表待檢物濃度。

基于上述論理，本發明提供了一種艾滋病檢測質控血清的配制方法：該方法包括以下步驟：

（1）選擇陽性血清：

所選用HIV陽性血清樣本需經ELISA檢測為強陽性，并經蛋白質印跡（以后簡稱：Western?Blot）確證；

（2）選擇和處理陰性血清

選用正常人血清，該血清為HIV抗體陰性、HBsAg陰性、HCV抗體陰性，并且無肉眼可見的溶血、黃疸、乳糜顆粒、絮狀沉淀物；

將上述陰性血清滅活補體，除菌備用；

（3）最終稀釋倍數的確定：

a.?第一步稀釋

用處理后的陰性血清對HIV陽性血清進行10，100，1000……10×梯度稀釋，并對各稀釋樣本進行ELISA檢測，測得各樣本的OD值，找出樣本OD值相對于原陽性血清出現明顯下降的稀釋倍數，即該稀釋倍數為第一步稀釋倍數，該樣本作為下步稀釋的母液；

b.?第二步稀釋

對上步獲得的母液再進行2,?4,?8……2×系列稀釋，并對各稀釋樣本進行ELISA檢測，測得各樣本的OD值，計算出S/CO值和反應OD值，確定第二步稀釋倍數，具體方法為：

當2×系列稀釋的樣本中某一稀釋倍數樣本獲得的S/CO值恰巧為所需配制的數值，直接采用該稀釋倍數為第二步稀釋倍數；

當2×系列稀釋的樣本中沒有S/CO值沒有出現所需配制的數值，則進行以下計算：

(ⅰ)?選一個OD值在2.0以下，S/CO值最接近所需配制數值的稀釋倍數，上下均可；

(ⅱ)?計算所選稀釋倍數的反應OD值，所述反應OD值=該稀釋倍數對應的樣本OD值-陰性對照OD值；

(ⅲ)?計算所需配制S/CO值的質控血清的反應OD值，所述反應OD值=所需配制的S/CO值×cutoff值-陰性對照OD；

(ⅳ)?根據以下公式計算第二步稀釋倍數:

X2=X1*Y1/Y2

其中，X2：第二步稀釋倍數

X1：步驟(ⅰ)中所選的S/CO值最接近所需配制值的稀釋倍數

Y1：步驟(ⅱ)所得的反應OD值

Y2：步驟(ⅲ)所得的反應OD值

c.?最終稀釋倍數=第一步稀釋倍數×第二步稀釋倍數；

（4）稀釋分裝

將選定的陽性血清和陰性血清，按照步驟（3）確定的最終稀釋倍數在無菌條件下進行稀釋，稀釋后攪拌過夜，充分混勻，分裝于凍存管中備用。

上述方法中，所述陽性血清優選為Western?Blot全條帶的樣本，并且是將幾份HIV強陽性血清混合物。