[發明專利]一種艾滋病檢測質控血清的配制方法

有效

• 申請號: 201010611312.8
• 申請日: 2010-12-29
• 公開（公告）號: CN102128927A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 朱紅;劉建禮;張紹福
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: G01N33/571
• 分類號: G01N33/571
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

1.一種艾滋病檢測質控血清的配制方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

（1）選擇陽性血清：

所選用HIV陽性血清樣本需經ELISA檢測為強陽性，并經Western?Blot確證；

（2）選擇和處理陰性血清

選用正常人血清，該血清為HIV抗體陰性、HBsAg陰性、HCV抗體陰性，并且無肉眼可見的溶血、黃疸、乳糜顆粒、絮狀沉淀物；

將上述陰性血清滅活補體，除菌備用；?

（3）最終稀釋倍數的確定：

a.?第一步稀釋

用處理后陰性血清對HIV陽性血清進行10，100，1000……10×梯度稀釋，并對各稀釋樣本進行ELISA檢測，測得各樣本的OD值，找出樣本OD值相對于原陽性血清出現明顯下降的稀釋倍數，即該稀釋倍數為第一步稀釋倍數，該樣本作為下步稀釋的母液；

b.?第二步稀釋

對上步獲得的母液再進行2,?4,?8……2×系列稀釋，并對各稀釋樣本進行ELISA檢測，測得各樣本的OD值，計算出S/CO值和反應OD值，確定第二步稀釋倍數，具體方法為：

當2×系列稀釋的樣本中某一稀釋倍數樣本獲得的S/CO值恰巧為所需配制的數值，直接采用該稀釋倍數為第二步稀釋倍數；?

當2×系列稀釋的樣本中S/CO值沒有出現所需配制的數值，則進行以下計算：

(ⅰ)?選一個OD值在2.0以下，S/CO值最接近所需配制數值的稀釋倍數，上下均可；

(ⅱ)?計算所選稀釋倍數的反應OD值，所述反應OD值=該稀釋倍數對應的樣本OD值-陰性對照OD值；

(ⅲ)?計算所需配制S/CO值的質控血清的反應OD值，所述反應OD值=所需配制的S/CO值×cutoff值-陰性對照OD；

(ⅳ)?根據以下公式計算第二步稀釋倍數:

X2=X1*Y1/Y2?

其中，X2：第二步稀釋倍數

X1：步驟(ⅰ)中所選的S/CO值最接近所需配制數值的稀釋倍數

Y1：步驟(ⅱ)所得的反應OD值

Y2：步驟(ⅲ)所得的反應OD值

c.?最終稀釋倍數=第一步稀釋倍數×第二步稀釋倍數；

（4）稀釋分裝

將選定的陽性血清和陰性血清，按照步驟（3）確定的最終稀釋倍數在無菌條件下進行稀釋，稀釋后攪拌過夜，充分混勻，分裝于凍存管中備用。

2.根據權利要求1所述的艾滋病檢測質控血清的配制方法，其特征在于，所述陽性血清為Western?Blot全條帶的樣本，并且是幾份HIV強陽性血清的混合物。

3.根據權利要求1所述的艾滋病檢測質控血清的配制方法，其特征在于，步驟（2）中，所述滅活補體是將所述陰性血清在56℃條件下，處理30分鐘；所述除菌采用0.45μm微孔濾膜過濾。

4.根據權利要求1所述的艾滋病檢測質控血清的配制方法，其特征在于，所述步驟（4）中，確認最終稀釋倍數后，進行稀釋時采用逐步稀釋法，一次稀釋倍數不超過10倍。