[發(fā)明專利]貽貝酶解多肽及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010610946.1
• 申請日: 2010-12-16
• 公開（公告）號: CN102558296A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁國芳;楊永芳;黃芳芳;鄭玉寅;李榮;許丹;莊黛娜;楊最素;郁迪;徐銀峰;閆海強
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋學(xué)院
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/01;A61P35/00
• 代理公司: 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛(wèi);景豐強

1.一種貽貝酶解多肽，其特征在于包含如下氨基酸序列：

Asp?Leu?Tyr。

2.一種如權(quán)利要求1所述貽貝酶解多肽的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

①取貽貝肉，制成均漿，調(diào)節(jié)pH值9.5～10，料液比為1∶2～1∶3，添加堿性蛋白酶，加酶量為1500～2000U/g，酶解時間為6～8小時，酶解溫度為45～50℃，滅酶后離心，取上層清液；

②將上述的清液經(jīng)過超濾，收集分子量3K以下的水解液，濃縮并冷凍干燥；

③DEAE-SepharoseFF離子柱交換柱色譜分離，將步驟②中的冷凍干燥后產(chǎn)物通過DEAE-SepharoseFF離子柱交換柱，0.1～1mol/LNaCL梯度洗脫，洗脫速度1～1.5mL/min，蛋白檢測儀280nm進行檢測，對各洗脫峰分別進行收集，濃縮后冷凍干燥，將干燥后得到的各個峰組分采用MTT法進行抗腫瘤活性實驗，進一步確定目標(biāo)肽所在的洗脫峰，并對該峰大量收集，濃縮并冷凍干燥；

④采用Sephadex?G-25凝膠柱色譜分離，將步驟③所得的具有最高抗腫瘤活性的冷凍干燥后產(chǎn)物過Sephadex?G-25凝膠柱，流動相為蒸餾水，流速為1.5～2mL/min，蛋白檢測儀280nm進行檢測，對各洗脫峰分別進行收集，濃縮后冷凍干燥并用MTT法進行抗腫瘤活性實驗；

⑤高效液相色譜純化，將步驟④中得到的具有最高抗腫瘤活性冷凍干燥后產(chǎn)后過反相高效液相柱，色譜柱為Zorbax?SB?C₁₈(250mm×9.4mm，5μm)；柱溫為室溫；流動相為乙腈和水，梯度洗脫：0～20min，乙腈濃從0％變化到95％，洗脫速度2.5～3.0mL/min，紫外檢測波長220nm。

3.權(quán)利要求2或3所述的貽貝酶解多肽在抗前列腺癌上的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求2或3所述的貽貝酶解多肽在抗前列腺癌DU-145細(xì)胞抑制增殖上的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求2或3所述的貽貝酶解多肽在抗前列腺癌PC-3細(xì)胞抑制增殖上的應(yīng)用。