[發明專利]一種B群腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201010610135.1
• 申請日: 2011-02-11
• 公開（公告）號: CN102028941A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發明（設計）人: 李健峰;彭世澤;姬秋彥;李智華;畢研偉;高丹丹;徐維明
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學生物學研究所
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;A61P31/04
• 代理公司: 云南協立專利事務所 53108
• 代理人: 旃習涵

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，更具體的說，本發明涉及一種B群腦膜炎重組蛋白嵌合疫苗。同時，本發明還涉及所述疫苗的制備方法。

背景技術

流行性腦脊髓膜炎（簡稱流腦）是由奈瑟氏腦膜炎球菌（Nesseria?meningitidis）引起的急性呼吸道傳染病，流腦是細菌性腦脊髓膜炎中唯一能造成流行的疾病，引起相當高的病死率和致殘率。流腦呈世界范圍分布，全世界流腦的平均年發病率為1～10/10萬，在流行地區流行期間其年發病率可達500/10萬以上。流腦從病原體的發現至今已超過100年，目前在世界上許多國家仍未能得到有效控制，仍是世界范圍的一個嚴重公共健康問題。

腦膜炎疫苗是全球兒童常規接種的細菌性疫苗之一。目前，該類疫苗的使用形式主要是采取多糖或者多糖結合蛋白疫苗兩種形式。由于A、C、W、Y群多糖疫苗的應用，有效地降低了腦脊髓膜炎的發病率。而?B群腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseria?meningitidis?group?B,?MenB)莢膜多糖結構因與人體神經細胞黏附分子同源，而不能激發有效的保護性免疫，因此其多糖不能有效預防B群腦膜炎奈瑟菌的感染。因此，發展通用的蛋白質疫苗勢在必行。

能作為候選疫苗的具有免疫原性的蛋白質需具備以下特點：在大多數菌株中都表達且結構保守；可誘生殺菌抗體或保護性抗體。現有技術中，研制與應用的有B群外膜囊泡（OMV）疫苗，其主要包括單價的VA-MENGOC-BC（古巴）、MenBvac（挪威）、MENZBTM（新西蘭），以及荷蘭研制出的6價?PorA?OMV疫苗，此類疫苗有其局限性，只能保護特定型別的B群Nm。瑞士諾華公司（Novartis）研制的5CVMB疫苗三種主要的抗原為GNA2132、GNA1870、NadA，另外的兩種抗原為GNA1030、GNA2091，但是此類疫苗也具有菌株的保護性差異。另外諾華公司研制的FHBP蛋白疫苗，方法是對FHBP進行氨基酸的替換和刪除，已經開始二期臨床試驗。

當前，國內外B群Nm疫苗研究主要集中于一些特別的外膜蛋白上。其中腦膜炎球菌外膜上，與腦膜炎球菌致病性密切相關的FHBP（Factor?H-binding?Protein），是一外膜脂蛋白。由于具有較高的保守性成為了最有希望的MenB候選疫苗抗原之一。FHBP即為為H因子結合蛋白。因子H是補體替代途徑的關鍵調節子，它在因子I介導的C3b裂解為滅活片段iC3b過程中發揮輔助因子作用。也促進替代途徑C3轉化酶C3bBb?的衰變。FHBP和因子H結合可下調替代途徑，從而有利于腦膜炎奈瑟菌生存。根據FHBP氨基酸的差異，可以將MenB分為V1、V2、V3三個FHBP變異型，變異型內高度保守而變異型間差異較大，針對FHBP的抗體在變異型內具有保護作用。分析FHBP氨基酸序列發現，FHBP包含有三個結構域ABC，A結構域在三個變型中是一致的，抗V1的抗體由B結構域誘導產生，而抗V2或V3的抗體由位于C結構域174-216位的氨基酸誘導產生。因此，由V1變異型的全長FHBP和V2變異型位于C結構域的一段抗原表位組成的融合蛋白(FHBP-C2)能誘發機體產生針對所有MenB的保護性抗體。

本發明利用基因工程的手段，構建表達純化了一種B群腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗。此融合蛋白(FHBP-C2)大小約為37KD,能誘導機體產生高效價的抗體，并且此抗體能誘發補體依賴的殺菌反應。另外，由于該蛋白能在大腸桿菌中表達，例如BL21,因而有利于大規模培養制備。

發明內容

本發明的目的在于針對現實狀況的迫切需要，利用基因工程的手段，提供一種B群腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗。同時，本發明還提供一種所述重組蛋白嵌合疫苗的制備方法。該方法所建立的質粒的構建、蛋白的分離純化方法，可以制備數種腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗。

本發明的目通過下述技術方案予以實現。

*?除非另有說明，本發明中所采用的百分數均為質量百分數。

A.本發明提供了一種B群腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗，該疫苗由下列成分組成：含有基因工程表達并純化的B群腦膜炎球菌FHBP融合蛋白75000μg?/?ml，氫氧化鋁佐劑1mg?/?ml。

其中，①B群腦膜炎球菌FHBP融合蛋白由B群腦膜炎球菌FHBP蛋白V1變異型全長氨基酸序列和V2變異型位于C結構域的一段抗原表位通過Gly-Pro-Gly連接肽融合而成；②?按照FHBP蛋白的趨異性可以將B群腦膜炎球菌分為三個變異型，該重組蛋白疫苗是由變異型V1的全長FHBP與變異型V2的位于174-216位的一段氨基酸(C2)連接而成，中間是一段連接肽Gly-Pro-Gly。