[發(fā)明專利]一種B群腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010610135.1
• 申請日: 2011-02-11
• 公開（公告）號: CN102028941A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李健峰;彭世澤;姬秋彥;李智華;畢研偉;高丹丹;徐維明
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;A61P31/04
• 代理公司: 云南協(xié)立專利事務(wù)所 53108
• 代理人: 旃習(xí)涵

1.一種B群腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗，其特征在于，該疫苗由下列成分組成：含有基因工程表達并純度在90%以上的B群腦膜炎球菌FHBP融合蛋白75000μg?/?ml，氫氧化鋁佐劑1mg?/?ml;?

其中，B群腦膜炎球菌FHBP融合蛋白由B群腦膜炎球菌FHBP蛋白V1變異型全長氨基酸序列和V2變異型C結(jié)構(gòu)域抗原表位通過Gly-Pro-Gly連接肽融合而成。

2.按照權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，該疫苗選自?SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列。

3.按照權(quán)利要求2所述的疫苗，其特征在于，該疫苗選自下述核苷酸序列：在嚴謹?shù)碾s交條件下與編碼的SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列雜交的核苷酸序列所編碼的氨基酸序列。

4.按照權(quán)利要求3所述的疫苗，其特征在于，具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

5.一種含有權(quán)利要求4的任意一項所述核苷酸序列的表達載體。

6.一種含有權(quán)利要求5的表達載體的宿主細胞。

7.一種B群腦膜炎球菌蛋白嵌合疫苗的制備方法，其特征在于，該方法采用下述順序的步驟：

（1）采用基因工程的方法，搭橋PCR構(gòu)建含有B群腦膜炎球菌FHBP?V1變異型的全長氨基酸序列和FHBP?V2變異型的C結(jié)構(gòu)域融合而成的基因片段，克隆入pET30a(+)載體后，IPTG誘導(dǎo)表達；

（2）表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE及Western鑒定分析，鎳離子親和層析柱純化，獲得的蛋白純度達到90%以上；分子量的大小約為37kD，與B群腦膜炎球菌抗血清特異結(jié)合，可以判定為FHBP-C2融合蛋白；該抗原組分在測定蛋白含量后作為半成品疫苗；

（3）根據(jù)半成品疫苗蛋白濃度，以生理鹽水稀釋至150mg/ml，同時與AL(OH)₃以對倍（V/V）混合，制成實驗性蛋白疫苗，并對其進行檢測；其半成品蛋白含量>50000μg/ml，成品蛋白含量為75mg/ml；該疫苗即為所需的腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗。

8.權(quán)利要求7所述的質(zhì)粒的構(gòu)建、蛋白的分離純化方法在制備數(shù)種腦膜炎球菌重組蛋白嵌合疫苗中的應(yīng)用。