[發(fā)明專利]一種快速鑒別棉鈴蟲和煙青蟲的分子生物學(xué)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201010609429.2 | 申請(qǐng)日： | 2010-12-28 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN102134599A | 公開（公告）日： | 2011-07-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 段焰青;李青青;者為;王明鋒;葉靈;王堅(jiān);楊麗萍;王文元 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 紅云紅河煙草（集團(tuán)）有限責(zé)任公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/68 | 分類號(hào)： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 云南協(xié)立專利事務(wù)所 53108 | 代理人： | 旃習(xí)涵 |
| 地址： | 650202*** | 國(guó)省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 鑒別 棉鈴蟲 煙青蟲 分子生物學(xué) 方法 | ||
1.一種快速鑒別棉鈴蟲和煙青蟲的分子生物學(xué)方法，其特征在于，該方法包括下述順序的步驟：
（1）采用標(biāo)準(zhǔn)酚-氯仿法或DNA抽提試劑盒提取棉鈴蟲和煙青蟲總DNA；
（2）利用DNA條形碼引物擴(kuò)增線粒體CO1前部序列作為標(biāo)記；
（3）進(jìn)行物種鑒別的序列特征比對(duì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒別方法，其特征在于，所述步驟1?中為避免真菌和線蟲的污染，舍去腹部，翅部以及觸角，只從其頭、胸及腿部提取DNA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒別方法，其特征在于，所述步驟2的PCR反應(yīng)體系為50μl，其中模板DNA約25ng，1×PCR?buffer，2.5mM?Mgcl2，1mM?dNTP，2?μg/μl?BSA，正、反向引物各2?pM，TaqDNA?聚合酶1個(gè)單位；具體操作為，加去離子水調(diào)至終體積50μl，以石蠟油封蓋體系；PCR反應(yīng)條件如下：95℃預(yù)變性3分鐘，94℃?變性1分鐘，50℃?退火1分鐘，72℃延伸1分鐘；5個(gè)循環(huán)后，72℃再延伸10分鐘；測(cè)序反應(yīng)按廠家建議的條件，使用Applied公司的BigDye?Terminator?kit（V2.0）在ABI?377?自動(dòng)測(cè)序儀（Applied?Biosystems）上電泳測(cè)序。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒別方法，其特征在于，所述步驟3是按下表所示的核苷酸序列特征變異位點(diǎn)進(jìn)行物種鑒別：??
。
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