[發明專利]一種從銀杏內酯混合物中分離銀杏內酯B的方法

有效

• 申請號: 201010608847.X
• 申請日: 2010-12-28
• 公開（公告）號: CN102070647A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 邢華斌;曹義風;楊啟煒;蘇寶根;楊亦文;蘇云;張芮菡;倪曉蕾;任其龍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07D493/22
• 分類號: C07D493/22
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及銀杏內酯B的分離方法，屬于化學工程技術領域，具體涉及一種從銀杏內酯混合物中分離銀杏內酯B的方法。

背景技術

銀杏內酯是銀杏葉中的一類主要活性成分，是強血小板活化因子(platelet-activating?factor，PAF)受體拮抗劑，具有擴張血管、增加血流量、改善微循環、清除自由基、抗過敏、抗菌抗炎、抗腫瘤、抗器官移植中的排斥作用等療效。銀杏內酯具有十二碳骨架結構，根據取代基的不同分為銀杏內酯A(ginkgolide?A，GA)、銀杏內酯B(ginkgolide?B，GB)、銀杏內酯C(ginkgolide?C，GC)、銀杏內酯M(ginkgolide?M，GM)和銀杏內酯J(ginkgolide?J，GJ)，此外還有白果內酯(bilobalide，BB)。銀杏內酯的活性與化學結構密切相關，其中銀杏內酯B對PAF的拮抗作用最強，具有更高的藥用價值，銀杏內酯B注射液已作為國家一類新藥上市。因此，有必要采用合適的方法將銀杏內酯B從總銀杏內酯中分離出來，制備得到高純度的銀杏內酯B。

銀杏內酯B的來源有提取分離、化學合成和植物細胞培養，其中從人工栽培的銀杏中提取分離是目前生產中最常用的方法。銀杏內酯B可以直接從銀杏葉或銀杏葉提取物中分離，但這個過程很不經濟，收率極低，也可先從銀杏葉中分離得到含有多種銀杏內酯同系物的總銀杏內酯，再從總銀杏內酯中精制獲得銀杏內酯B，如中國專利ZL03152921.6中公開的方法。銀杏內酯B在銀杏葉中含量較低，約為0.2％，在銀杏提取物中也只有1％～2％。銀杏內酯A、銀杏內酯C、銀杏內酯J以及白果內酯等與銀杏內酯B結構相似、性質差異小，這些物質同時存在于總銀杏內酯混合物中，對銀杏內酯B的分離純化造成了很大的困難。

現有的銀杏內酯B分離純化方法有：

(1)中國專利申請CN200510063407.X報道了一種以銀杏葉或銀杏葉水提物為原料，正丁醇為萃取劑，將萃取得到的固體用結晶的方法精制，最后得到純度90％以上的銀杏內酯B單體，但該方法收率極低，僅在1％以上，不具備工業應用價值，同時常溫下總銀杏內酯在水/正丁醇萃取體系中分配系數僅為0.05左右，這導致該方法處理量極低，不具備實際應用價值。

(2)中國專利申請CN200610097492.6報道了以銀杏葉為原料，先用葉干重8～25倍、濃度為5％～30％的乙醇回流提取，將濾液濃縮，加入吸附劑吸附，過濾，濾餅用3～10倍乙醇回流提取，收集提取液，濃縮，靜置析出銀杏內酯，再用10～50倍的甲醇重結晶若干次，過濾結晶，干燥得到純度為97％以上的銀杏內酯B的方法。由于銀杏內酯A、銀杏內酯B和銀杏內酯C的溶解度差異很小，結晶純化難度大，因此重結晶方法的收率很低，同時溶劑消耗量大。

(3)目前，制備銀杏內酯B較常用的方法是柱層析法，其核心步驟是采用柱層析分離銀杏內酯A、銀杏內酯B和銀杏內酯C，得到高純度銀杏內酯B。該方法首先以銀杏葉或銀杏葉提取物為原料，經過吸附柱分離、溶劑萃取、高速逆流色譜等步驟得到總銀杏內酯，再經柱層析將銀杏內酯A、銀杏內酯B和銀杏內酯C分開，通過結晶精制，可得到純度大于95％的銀杏內酯B。柱層析的固定相包括如中國專利ZL200710050245.5中公開的硅膠、如中國專利ZL200710106040.4中公開的大孔樹脂和如中國專利申請CN200810046162.3中公開的C18。柱層析法可以分離得到較高純度的產品，有一定的應用價值，但同時存在處理量小、回收率低、溶劑消耗量大、吸附劑重復使用困難等不足。

(4)中國專利ZL?200310104958.7報道了一種用模擬移動床分離銀杏內酯A、銀杏內酯B和銀杏內酯C等同系物的方法，得到的銀杏內酯B純度大于90％。這種方法與柱層析法相比，收率較高，且模擬移動床過程為連續過程，但是該方法對設備要求較高，設備投資大，且模擬移動床作為色譜操作過程，處理量小，溶劑消耗大。

發明內容