[發明專利]一種檢測人PIK3CA基因突變的方法和試劑盒

無效

• 申請號: 201010608500.5
• 申請日: 2010-12-28
• 公開（公告）號: CN102533958A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 張泓;姬云;侯青
• 申請（專利權）人: 蘇州科貝生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物技術和醫學領域，具體涉及一種檢測PIK3CA基因突變的方法和試劑盒。

背景技術

PIK3CA基因是逆轉錄病毒v-p3k癌基因在細胞內的同系物，編碼的I類磷脂酰3激酶(phosphatidylinositol?3-kinases，PI3Ks)是由一個p110催化亞單位和一個p85調節亞單位組成的異元二聚體，由生長因子受體酪氨酸激酶如表皮生長因子受體(epidermal?growth?factor?receptor，EGFR)、胰島素受體等激活。PI3Ks活化后催化磷脂酰肌醇4磷酸(PI-4-P)和磷脂酰肌醇4，5-二磷酸(PI-4，5-P2)磷酸化成磷脂酰肌醇3，4二磷酸(PI-3，4-P2)和磷脂酰肌醇3，4，5三磷酸(PI-3，4，5-P3，Ptd?InsP3)。從而活化一系列蛋白，包括調節細胞增殖、存活和細胞周期調控等，涉及mTOR(target?of?repamycin)、BAD、Caspace?9、Tuberin、GSK3β和FH(Fork?head)轉錄因子家族亞群等眾多的靶分子。其中比較重要的是蘇-絲氨酸激酶AKT。AKT與Ptd?Ins?P3結合后被定位到質膜，然后被磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1和磷酸肌醇依賴性蛋白激酶2活化，從而抑制細胞凋亡，促進細胞存活。當PIK3CA基因以基因擴增或點突變等形式激活時，其轉錄與翻譯水平升高，通過PI3K-AKT途徑，使AKT過度激活，無限制的促進細胞生長和繁殖，并抑制細胞凋亡，最終導致腫瘤發生。

對PI3K家族全部16個成員的激酶結構域外顯子編碼區進行序列分析顯示，PIK3CA是唯一被發現由體細胞突變引起致癌的基因。多個研究均提出PIK3CA基因的突變80％-90％聚集在該基因的第9外顯子和第20外顯子這兩個熱點區域，分別對應該酶的螺旋區和激酶區。用體外細胞培養的方法對這兩個熱點突變區的研究發現其突變不僅可以減少細胞的凋亡還可以促進腫瘤的浸潤、提高其下游激酶P13Ks的活性。關于PIK3CA突變這兩個熱點區的研究發現，激酶區和螺旋區的突變可能通過不同的機制引起酶功能性的改變。不同區域的突變，分別通過與P13Ks的調節亞單位p85和RAS-GTP相互作用的不同機制導致P13Ks的活化。螺旋區突變誘導獲得性的功能改變時不依賴與p85的結合，但卻需要與RAS-GTP的相互作用；相反的，激酶區的突變在缺少RAS-GTP時是有效的，但卻高度依賴p85。可見，激酶區和螺旋區的突變是通過兩個不同的且獨立的機制發揮作用的，在同一個分子中這兩種機制的突變是相互協同的。

研究表明，PIK3CA在多種腫瘤中出現擴增或者過表達。有研究報道，PIK3CA基因在結腸癌、卵巢癌和乳腺癌、胃癌和肝癌等多種腫瘤中發生高頻體細胞突變。有研究證實，PIK3CA基因突變是乳腺癌中最常見的基因突變之一。乳腺癌組織中PIK3CA基因突變的頻率在8％-40％。最近研究證實PI3K通路的激活，無論是通過抑癌基因PTEN的失活還是癌基因PIK3CA的激活，都可引起乳腺癌患者對靶向藥物Herceptin的耐藥。

在2010年10的第35屆歐洲腫瘤內科學會(ESMO)大會上，公布了一項有關PIK3CA突變對表皮生長因子受體-酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)治療非小細胞肺癌(NSCLC)的預后及療效預測價值的研究結果。入組患者的PIK3CA、EGFR、KRAS突變率分別為4.8％、25.3％、6.8％。PIK3CA突變與緩解不相關(P＝0.96)，但與較短的至疾病進展時間(TTP，P＝0.04)及OS期(P＝0.005)相關。EGFR突變與療效良好相關(P＜0.0001)。KRAS突變與較短的TTP(P＝0.003)相關，但與OS無關。多變量分析顯示，校正組織學類型和體能狀態(PS)后，PIK3CA突變仍是OS的顯著預測因素(P＝0.004)，KRAS、PIK3CA突變仍預示TTP較短(P＝0.009，P＝0.003)。研究者認為應將KRAS、PIK3CA突變納入EGFR-TKI治療耐藥及生存預測標志物中。