[發(fā)明專利]天然活性葡寡六糖的Cap-Tag固相合成方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010608488.8
• 申請日: 2010-12-17
• 公開（公告）號: CN102532343A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 魏國華;蔡超;杜宇國
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態(tài)環(huán)境研究中心
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種天然活性天然活性葡寡六糖的分子的Cap-Tag策略的固相合成方法，屬于有機化學技術范疇。

背景技術

寡糖是生物體內重要的信息物質，在很多生理過程中起著關鍵的作用。當與蛋白質結合時能得到糖蛋白，蛋白質的結構與功能都隨之改變，而寡糖與脂結合得到糖脂，后者在細胞之間識別及信號傳導中的作用不可或缺。胞壁寡糖在細胞之間的通訊、識別和相互作用、胚胎發(fā)生、轉移、信號傳遞、細胞運動與黏附以及病原與宿主細胞的相互作用方面起著重要作用。如寡糖能激活植物的防衛(wèi)系統(tǒng)，誘導根瘤菌的固氮作用，還與炎癥、癌癥、心血管癥密切相關等，寡糖的這些重要作用使它成為生命科學關注的焦點。最新的研究表明：一定結構的葡寡糖及其蛋白綴合物顯示出較好的抗癌活性，而且硫酸酯化的衍生物表現出很好的血管再生作用，與臨床應用的肝素具有同等功效。

雖然各種方法和策略已經在寡糖合成中得到成功應用，但寡糖及其綴合物的合成仍然是有機合成中最為繁瑣最為艱巨的工作之一，而固相合成是提高多肽及寡糖系列化合物合成效率的方法之一。我們設計了Cap-Tag策略用于寡糖的固相合成，從而避免了合成過程中的反應不完全導致的缺續(xù)等一系列問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是利用快速高效的Cap-Tag策略的固相合成方法實現MMP寡糖分子的快速、大量的合成工作，從而進一步開展其生物活性的研究。

本發(fā)明涉及一種天然活性葡寡六糖的Cap-Tag固相合成方法，屬于有機化學及固相合成技術范疇。如通式I所示，利用Merrifield等固相樹脂，首先將對羥基芐醇連接在固相樹脂上，然后將葡萄糖一位活潑羥基通過適當長度的連接臂連接在固相樹脂上。再將葡萄單糖依次連接在還原端葡萄糖上，缺續(xù)的葡萄寡糖采用Cap-Tag策略分離，最終產物脫保護后并從固相上釋放出來，得到了葡寡六糖分子。本方法操作簡單，無需特別的儀器設備，為建立快速、高效的固相合成寡糖分子的方法或者設計構造固相寡糖合成儀提供了基礎。

通式I

具體實施方式：

11.4克甘露糖硫苷(50.9毫摩爾)溶于100毫升的N，N’-二甲基甲酰胺中，反應體系溫度降低，然后加入9.75毫升2-甲氧基丙烯(102毫摩爾)和438毫克對甲苯磺酸，反應混合物在0～5℃條件下劇烈攪拌直至TLC檢測原料已完全消失(～5小時左右)。隨后加入干燥的無水碳酸鈉，在低溫下繼續(xù)攪拌約1小時。反應體系加入二氯甲烷后水洗，有機相用無水硫酸鈉干燥，產物在乙酸乙酯-石油醚中重結晶得到白色固體2(11.1克，產率83％)。

將7.92克化合物2(30.00毫摩爾)和8.25克二丁基氧化錫(33.00毫摩爾)置于150毫升MeOH中，加熱回流至溶液變?yōu)槌吻澹缓髮⒎磻芤簼饪s至干，并用甲苯帶三次后高真空油泵抽干。殘渣與7.50毫升碘甲烷(120毫摩爾)溶于干燥的150毫升N，N’-二甲基甲酰胺中，然后加熱至50℃反應3小時至TLC檢測反應完畢。反應溶液濃縮至干后，加入乙酸乙酯，固體過濾，有機相水洗后干燥。將溶液在減壓條件下濃縮蒸除溶劑后，用硅膠色譜柱分離純化剩余物(淋洗液為乙酸乙酯∶石油醚，1∶3)得到泡沫狀白色固體化合物3(5.83克，產率70％)。

5.5克化合物3(19.8毫摩爾)溶于20毫升吡啶中，然后降溫至0℃后，緩慢逐滴加入3.05克苯甲酰氯(21.7毫摩爾)，反應體系在室溫下攪拌4小時。反應進程由TLC檢測，原料消失后，逐滴加入甲醇。溶液濃縮至干，殘渣加入二氯甲烷，依次用1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉、飽和氯化鈉溶液洗。有機相用無水硫酸鈉干燥后濃縮至干再用乙酸乙酯-石油醚體系重結晶得到白色固體。將產物置于100毫升乙酸-水(v/v?4∶1)的溶液中，70℃攪拌4小時。TLC檢測反應完畢，溶液濃縮至干并用甲苯共沸濃縮后得到糖漿狀化合物4：[α]D25+95.1(c?2.25，CHCl₃)。230毫克化合物4(0.50毫摩爾)和0.2毫升甲醇(5.00毫摩爾)溶于5毫升二氯甲烷中，體系置于氮氣保護及0℃下，依次加入134毫克N-碘代丁二酰亞胺(0.60毫摩爾)和9微升TMSOTf(0.05毫摩爾)。反應溶液在此環(huán)境下攪拌2小時至TLC檢測反應完畢。加入三乙胺中和反應后，將溶液在減壓條件下濃縮蒸除溶劑后，用硅膠色譜柱分離純化剩余物(淋洗液為乙酸乙酯∶石油醚，1∶5)得到無色糖漿狀化合物5(193毫克，產率90％)。