[發明專利]一種卵泡刺激素的制備方法

無效

• 申請號: 201010608287.8
• 申請日: 2010-12-21
• 公開（公告）號: CN102464713A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發明（設計）人: 萬龍巖;宣建剛;阮振興;有洪華;陳攀
• 申請（專利權）人: 上海麗珠制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/22;C07K1/18
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

1.一種卵泡刺激素的制備方法，該制備方法包括以下步驟：

(1)采用二乙基氨基乙基陰離子交換層析純化促性腺激素，獲得包含卵泡刺激素的中間體I；

(2)采用黃體生成素單抗親和層析除去中間體I中的黃體生成素，獲得包含卵泡刺激素的中間體II；

(3)采用羧甲基陰離子交換層析以及Cibacron?Blue染料親和層析進一步純化中間體II，得到卵泡刺激素。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括將步驟(3)得到的卵泡刺激素與輔料，優選為乳糖混合后凍干。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述二乙基氨基乙基陰離子交換層析為以二乙基氨基乙基為配基的瓊脂糖陰離子交換柱層析；所述黃體生成素單抗親和層析為以黃體生成素單抗為配基的瓊脂糖親和柱層析；所述羧甲基陽離子交換層析為以羧甲基為配基的瓊脂糖陽離子交換柱層析；所述Cibacron?Blue染料親和層析為以Cibacron?Blue染料為配基的瓊脂糖親和柱層析。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)包括以下步驟：

a.調節促性腺激素溶液的pH值，使得卵泡刺激素帶負電荷；

b.將促性腺激素溶液加到二乙基氨基乙基瓊脂糖陰離子交換層析柱；

c.以pH值為7.0～7.5的0.03mol/L?Tris-HCl水溶液洗脫；

d.以pH值為7.0～7.5的0.15mol/L?Tris-HCl水溶液洗脫，收集目視可見的條帶。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)包括以下步驟：

e.將中間體I的溶液加到黃體生成素單抗瓊脂糖親和層析柱；

f.以pH值為7.0～7.5的0.1mol/L?Tris-HCl水溶液洗脫，并檢測洗脫液在280nm處的OD值；

g.當280nm處的OD值開始上升時，收集洗脫液直至280nm處的OD值不再下降。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)包括以下步驟：

h.將中間體II的溶液加到羧甲基瓊脂糖陽離子交換層析柱；

i.以pH值為5.0～6.0的0.02mol/L醋酸鈉水溶液洗脫；

j.以pH值為8.5～9.5的包含0.05mol/L?Tris-HCl和0.20mol/L?NaCl的水溶液洗脫，收集目視可見的條帶；

k.將收集的溶液通過超濾膜，例如截留分子量為1萬的超濾膜脫鹽濃縮后，加到Cibacron?Blue染料瓊脂糖親和層析柱；

l.分別以pH值為9.5～10.0的包含0.05mol/L的甘氨酸-氫氧化鈉的水溶液和pH值為8.5～9.5的包含0.05mol/L?Tris-HCl和0.20mol/L?NaCl的水溶液洗脫；

m.以pH值為8.5～9.5的包含0.05mol/L?Tris-HCl和0.20mol/L?NaCl的水溶液洗脫，收集目視可見的條帶。

7.根據權利要求1至7中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述收集的產物用超濾膜，例如截留分子量為1萬的超濾膜進行脫鹽濃縮。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)、(2)和/或(3)包括向層析獲得的產物中加入乙醇，例如無水乙醇進行沉淀；然后進行干燥，例如真空干燥。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述層析獲得的產物與乙醇的體積比為1∶5。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的制備方法制備的卵泡刺激素。