[發(fā)明專利]一種西瓜果斑病毒金標核酸試紙條及其制備和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010606747.3
• 申請日: 2010-12-27
• 公開（公告）號: CN102128832A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發(fā)明（設計）人: 匡華;胥傳來;馬文蔚;陳偉;鄧小芳;馬偉;勇倩倩;王利兵
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;C12Q1/68
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種西瓜果斑病毒金標核酸試紙條，其特征在于由下吸水墊（1），膠體金偶聯(lián)Aptamer①（2），streptavidin-?Aptamer②（3），streptavidin-?Aptamer?③（4），上吸水墊（5），硝酸纖維素膜（6）和底板（7）所組成；

硝酸纖維素膜（6）固定于底板（7）上，硝酸纖維素膜（6）一端與上吸水墊（5）相聯(lián)；另一端或者與下吸水墊（1）相聯(lián)，或者與通過固定于硝酸纖維素膜（6）這一端的膠體金偶聯(lián)Aptamer①（2）與下吸水墊（1）相連；

膠體金偶聯(lián)Aptamer①（2）、streptavidin-Aptamer②（3）、streptavidin-?Aptamer?③（4）間隔地順序復合在硝酸纖維素膜（6）上；

其中，以streptavidin-Aptamer②（3）作為檢測帶，以streptavidin-Aptamer?③（4）作為參照帶；

測試紙寬度不低于3.5?mm，且外觀平整，材料附著牢固，液體移行速度不低于5?mm/min。

2.權利要求1所述的西瓜果斑病毒金標核酸試紙條的制備方法，其特征在于

(1)?biotin修飾的適配體Aptamer②與streptavidin按摩爾比1:4反應生成streptavidin-Aptamer②；

(2)?biotin修飾的Aptamer③與streptavidin按摩爾比1:4反應生成streptavidin-Aptamer?③；

(3)上吸水墊（5）和下吸水墊（1）分別貼于底板（7）上與硝酸纖維素膜（6）相聯(lián)；下吸水墊（1）或者與固定于硝酸纖維素膜（6）一端的膠體金偶聯(lián)Aptamer①（2）部分交疊；

(4)?下吸水墊（1）、膠體金偶聯(lián)Aptamer①（2）及上吸水墊（5）底面有不干膠紙用于固定于底扳（7）上。

3.用權利要求1所述試紙條檢測西瓜果斑病毒的方法，其特征在于：

(1)樣品制備

西瓜表面病斑處用5%次氯酸鈉溶液消毒后，分別切取病斑周圍和內(nèi)部尚未有病斑擴展的組織，在無菌水中研碎靜置30min后，用滅菌的接種環(huán)蘸取浸泡液在干燥的?YDC培養(yǎng)基平板表面劃線，置于28℃恒溫箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)一星期后得到西瓜果斑病毒，刮取培養(yǎng)皿表面西瓜果斑病毒溶于超純水中，即得到待測樣本；

所述YDC培養(yǎng)基為酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂培養(yǎng)基；

(2)操作

將試紙箭頭端浸泡在待測樣本中，不要超過下吸水墊，浸入30s，取出放平，10min讀取結果；

(3)檢測結果

陰性：

檢測帶、參照帶兩條帶都顯色，且檢測帶顏色深于參照帶顏色，說明樣品中不含西瓜果斑病毒；

檢測帶、參照帶兩條帶都顯色，且檢測帶顏色與參照帶顏色相同或接近，說明樣品的西瓜果斑病毒含量低于10ng/mL；

陽性：

檢測帶、參照帶兩條帶都顯色，但檢測帶顏色淺于參照帶顏色，說明檢測樣品中西瓜果斑病毒含量超過10ng/mL；

檢測帶不顯色，參照帶顯色，說明樣品中的西瓜果斑病毒含量高于15μmol/L。