[發明專利]從中藥材圓錐鐵線蓮中分離純化活性成分金色酰胺醇酯的方法

有效

• 申請號: 201010606380.5
• 申請日: 2010-12-27
• 公開（公告）號: CN102070485A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 田景奎;陳潤澤;張琳;應弘梅;崔磊;龐亞京;戚中杰;翟興英;傅之容
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07C237/22
• 分類號: C07C237/22;C07C231/24;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

技術領域

本發明是關于中藥有效成分的提取分離方法，具體涉及一種從藥用植物圓錐鐵線蓮中分離純化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法。

背景技術

圓錐鐵線蓮(Clematis?terniflora?DC.)系毛茛科（Ranunculaceae）鐵線蓮屬（Clematis）植物，用于治療扁桃體炎、咽喉炎以及風濕和類風濕性關節炎等，在日本做為中藥威靈仙替代品使用，其地上部分在浙江北部地區廣泛用于呼吸系統和泌尿系統炎癥、腫瘤的治療，特別是對慢性咽炎和慢性前列腺炎療效甚佳；其地上部分的藥理研究證明，黃酮及木脂素類成分具有顯著的生理活性。圓錐鐵線蓮在民間用藥中對于炎癥反應和腫瘤所表現出的確切療效激發了我們進一步研究其生物活性成分的興趣。在藥理活性相關實驗的指導下，我們首次在圓錐鐵線蓮中分離純化得到一種藥效成分金色酰胺醇酯，此成分有文獻報道具有很好的抗炎鎮痛活性，其抗炎機制是通過選擇性的抑制組織蛋白酶L和B來實現（Koneni?V.?Sashidhara,?Jammikuntla?N.?Rosaiah,??Ethika?Tyagi,?Rakesh?Shukla,?Ram?Raghubir,?Siron?M.?Rajendran.?Rare?dipeptide?and?urea?derivatives?from?roots?of?Moringa?oleifera?as?potential?anti-inflammatory?and?antinociceptive?agents.?European?Journal?of?Medicinal?Chemistry,?2009,?432-436.;?Kengo?Isshiki,?Yasuyuki?Asai,?Sumiko?Tanaka,?Maki?Nishio,?Tomofumi?Uchida,?Toru?Okuda,?Saburo?Komatsubara,?Naoki?Sakurai.?Aurantiamide?acetate,?a?selective?cathepsin?inhibitor,?produced?by?Aspergillus?penicilloides.?Biosci.?Biotechnol.?Biochem.,?2001,?1195-1997.）。此外，我們選擇神經膠質瘤細胞U251和U87對金色酰胺醇酯進行了初步體外藥理篩選，結果表明金色酰胺醇酯具有一定的抗腫瘤活性，其對U251和U87抑制的IC50均為25μM，金色酰胺醇酯對U251和U87的抑制機制是通過誘導腫瘤細胞產生自噬來實現的。本發明提供一種從中藥圓錐鐵線蓮中分離純化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法，此方法得到的金色酰胺醇酯純度較高，其產率（純品質量/藥材質量）可達到0.001%～0.1%。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種從藥用植物圓錐鐵線蓮中分離純化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法。

從藥用植物圓錐鐵線蓮中分離純化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法的步驟如下：

A：將新鮮采摘的毛茛科圓錐鐵線蓮藥材全草或莖葉于室溫下陰干，切段，加入2～50倍體積份濃度為1%～100%的乙醇，采用冷浸、滲漉、煎煮、超聲、加熱回流或微波進行提取，提取時間為0.1～5小時，過濾，藥渣用上述方法再提取2～10次，合并提取液，回收乙醇，得到總提物浸膏；

????B：取步驟A中總提物浸膏用1～20倍體積份的水稀釋，上裝有非極性、弱極性或中極性中的任意一種大孔樹脂分離柱進行純化，大孔樹脂用量為藥材量的2～40倍重量份，分離柱的徑高比為1：3～30，吸附流速為1～10BV/h；先用體積比為0.1%～50%的乙醇和水洗脫1～20BV，流速1～20BV/h；再用體積比為50%～100%的乙醇和水洗脫1～30BV，流速1～30BV/h，收集體積比為50%～100%的乙醇和水洗脫部分，回收乙醇，得到總提物純化部分；

C：取步驟B中總提物純化部分，拌入1～10倍重量份100～200目硅膠，將溶劑揮干得到拌樣硅膠；另取10～100倍重量份100～200目硅膠，干法裝柱，徑高比為1:3～30，將拌樣硅膠加入柱頂，上加硅膠做保護層，以氯仿-甲醇混合溶劑系統進行梯度洗脫，收集體積比為99:1～50:50的氯仿和甲醇洗脫液部分，薄層檢識。薄層色譜條件為：正向硅膠G預制板；展開劑為99:1～80:20的氯仿-甲醇。合并并回收洗脫溶劑，得到濃縮物；