[發(fā)明專利]羅丹明B的免疫親和柱-高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010600992.3
• 申請(qǐng)日: 2010-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN102087278A
• 公開（公告）日: 2011-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王利兵;胥傳來;宋珊珊;林菲;趙書閣;劉微波;趙媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N30/72;G01N30/14
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.一種羅丹明B的免疫親和柱-高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法，其特征在于以抗羅丹明B的抗體與四甲氧基硅烷TMOS偶聯(lián)包埋于層析柱中，通過吸附、洗脫達(dá)到樣品凈化的效果，最后通過高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測；

A、羅丹明B的免疫親和柱的制備，步驟為：

（1）取0.2mL的0.04mol/L?HCl溶液，0.75mL的去離子水，3.4mL的四甲氧基硅烷TMOS混勻，4℃保存2-3min；取出，超聲粉碎30min；

（2）取一質(zhì)量已知的燒杯，吸取20μL羅丹明B抗體，用pH7.4、0.01mol/L?PBS稀釋至1mL，得羅丹明B抗體溶液，4℃保存；

（3）取步驟（1）超聲完全后的混合液，吸取其中1mL試樣，加入羅丹明B抗體溶液中，混勻，使之凝膠；

（4）待凝膠結(jié)束后，燒杯稱重，置于37℃恒溫烘箱凝膠老化，待凝膠失去初重的50%時(shí)，老化過程結(jié)束，將1g老化后的凝膠研磨粉碎，裝柱；

（5）待柱中凝膠沉積穩(wěn)定后，用5mL?pH7.4、0.01mol/L的PBS預(yù)淋洗，洗去未包埋的羅丹明B抗體和其他干擾雜質(zhì)，最后用5mL?pH7.4、0.01mol/L的PBS平衡，即制得羅丹明B的免疫親和柱；

B、羅丹明B的免疫親和柱的吸附、洗脫：

平衡：10mL?pH7.4、0.01mol/L的PBS；

上樣：待測的樣品溶液；

洗滌：用5mL?pH7.4、0.01mol/L的PBS洗滌，再用5mL超純水洗滌；

洗脫：5mL甲醇洗脫，收集洗脫液待測；

C、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，步驟為：

（1）以一定水平的羅丹明B加入辣椒粉樣品中，在室溫下至少靜置15?min；

（2）取上述添加羅丹明B的辣椒粉樣品1g，加入10mL含體積百分20%丙酮的正己烷，震搖10?min，靜置、過濾使分離出上層清液，殘?jiān)尤?0mL含體積百分20%丙酮的正己烷重復(fù)提取一次，合并2次提取液，混勻；

（3）移取提取液于氮吹儀上吹干，用0.01M?PBS重溶，吹干后的樣品用0.01M?PBS以質(zhì)量計(jì)稀釋10倍；

（4）用10mL?0.01M?PBS平衡免疫親和柱；

（5）加樣，用5mL?0.01M?PBS洗滌，再用5mL超純水洗滌，洗去未吸附樣品；

（6）5mL甲醇溶液洗脫柱上樣品，收集洗脫液；

（7）洗脫液經(jīng)0.22?μm孔徑的聚四氟乙烯膜過濾后進(jìn)行高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測。