[發明專利]解淀粉芽孢桿菌LS05漆酶及其應用

無效

• 申請號: 201010599793.5
• 申請日: 2010-12-22
• 公開（公告）號: CN102154152A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 盧磊;趙敏;王天女;李泰侖;杜美惠;趙麗艷;汪春蕾
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/02;C12N15/53;C12R1/07
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1.解淀粉芽孢桿菌LS05，在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為CGMCC?No.4264。

2.一種芽孢漆酶，該漆酶由權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌LS05(Bacillus?amyloliquefaciens)產生的。

3.根據權利要求2所述的芽孢漆酶的制備，其特征在于按下列步驟進行：

a.解淀粉芽孢桿菌LS05劃線接種于固體產孢培養基上，37℃倒置培養5d后，所述的產孢培養基組份為(g/L)：營養肉湯8；KCl?1；MgSO₄·7H₂O?0.25；MnCl₂·4H₂O?0.002；瓊脂17；調pH7.0后高溫高壓滅菌，加入過濾除菌的0.5mmol/L?CaCl₂及0.001mmol/L?FeSO₄；

b.用無菌去離子水將固體培養基上的芽孢沖洗下來；

c.加入終濃度0.1mg/mL的溶菌酶，37℃水浴10min；

d.依次用含有10mmol/L?EDTA和0.3mg/mL?PMSF的1mol/L?NaCl、0.14mol/L?NaCl、0.1％(w/v)SDS和無菌去離子水清洗一遍；

e.80℃熱擊10min后用無菌去離子水清洗三遍后，裝入滅菌后的三角瓶中4℃避光保存。

4.根據權利要求2和3所述的芽孢漆酶，可在pH?2.2-10.0發揮作用，在30℃時催化底物ABTS的最適pH值為3.0，催化底物丁香醛連氮的最適pH值為6.6，催化底物2，6-二甲氧基苯酚的最適pH值為8.6。

5.根據權利要求2至4所述的芽孢漆酶，可在20-100℃發揮功能，在pH?6.6以丁香醛連氮為底物時最適反應溫度為70℃。

6.根據權利要求2至5所述的芽孢漆酶，可對不同結構的合成染料包括RBBR(Remazol?Brilliant?Blue?R，CAS?No：2580-78-1)，活性黑KN-B(CAS?No：17095-24-8)，結晶紫(CAS?No：548-62-9)和靛紅(CAS?No：860-22-0)進行脫色，脫色條件為：40℃，pH?6.6或9.0，芽孢漆酶懸液的終濃度是1mg/ml，染料終濃度分別為RBBR?100mg/L，活性黑KN-B?40mg/L，靛紅25mg/L，結晶紫5mg/L，加入終濃度是0.1mmol/L的漆酶介體乙酰丁香酮。

7.解淀粉芽孢桿菌具有漆酶活性的基因，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ?ID?No：1的DNA序列；

2)編碼序列表中SEQ?ID?No：2蛋白質序列的多核苷酸；

3)與序列表SEQ?ID?No：1限定的DNA序列具有90％以上的同源性，且編碼相同功能蛋白質的DNA序列。

8.根據權利要求7所述的基因，其特征在于：所述解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)漆酶基因是序列表中SEQ?ID?No：1。

9.解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)漆酶，是具有序列表中SEQ?ID?No：2氨基酸殘基序列的蛋白質。