[發(fā)明專利]持續(xù)焦慮小鼠特征蛋白質(zhì)指紋圖譜及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010599566.2
• 申請(qǐng)日: 2010-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN102175748A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王清馨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 王清馨
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62
• 代理公司: 太原華弈知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 14108
• 代理人: 李毅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及特征蛋白質(zhì)指紋圖譜檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種持續(xù)焦慮小鼠的特征蛋白質(zhì)指紋圖譜，以及該持續(xù)焦慮小鼠特征蛋白質(zhì)指紋圖譜的應(yīng)用。

背景技術(shù)

現(xiàn)代社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)不斷加劇，由此引發(fā)的心理疾病日益增多，焦慮癥作為一種普遍的心理障礙，也越來(lái)越大地威脅到人類的身心健康。流行病學(xué)研究表明，城市人口中大約有4.1～6.6％的人群患有得焦慮癥，但是，目前焦慮癥的臨床診斷準(zhǔn)確率與符合率卻并不盡如人意。近年來(lái)，在腫瘤學(xué)的探討中，心理社會(huì)因素日益受到學(xué)者們的關(guān)注，研究結(jié)果顯示，心理因素在癌癥的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中有著不可忽視的作用。癌癥作為一種心理應(yīng)激，可導(dǎo)致抑郁、焦慮情緒，而抑郁、焦慮情緒又可加速癌癥的惡化，降低患者的生活質(zhì)量，影響癌癥治療的結(jié)局，增加醫(yī)療費(fèi)用。癌癥患者中焦慮抑郁癥狀的發(fā)生率明顯高于正常人。

但是，當(dāng)前國(guó)內(nèi)外對(duì)于焦慮的研究?jī)H限于量表的測(cè)評(píng)，例如SAS焦慮自評(píng)量表、HAMA焦慮量表等。上述各種焦慮評(píng)定量表具體操作方面專業(yè)性強(qiáng)，易受病人及評(píng)定人員主觀因素的影響，影響觀察的準(zhǔn)確性和客觀性，且實(shí)施起來(lái)較為復(fù)雜，量表評(píng)分不十分準(zhǔn)確，有一定的差異。它們大多是很實(shí)用的篩選焦慮癥的評(píng)定量表，但并不能準(zhǔn)確地反映焦慮狀態(tài)，因此僅能為臨床診斷焦慮癥提供參考，而不能作為診斷的主要參考依據(jù)。

2002年獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的蛋白質(zhì)芯片表面加強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(surface-enhanced?laser?desorption/ionization?time-of-flight?mass?spectrometer，SELDI-TOF-MS)的問(wèn)世，為生命科學(xué)領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力的分析測(cè)試手段。SELDI技術(shù)主要結(jié)合了質(zhì)譜、層析等技術(shù)原理對(duì)樣品進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)，優(yōu)勢(shì)是操作簡(jiǎn)單易行，無(wú)需純化，樣本用量少并可同時(shí)進(jìn)行高通量分析，可直接對(duì)粗樣本血清、組織、細(xì)胞裂解液、尿液等進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)SELDI檢測(cè)獲得相關(guān)蛋白質(zhì)指紋圖譜，在蛋白分離方面具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。該方法可以快速地分析各種生物樣品中蛋白質(zhì)組的組成，在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、臨床疾病診斷以及藥物研發(fā)方面顯示出廣闊的應(yīng)用前景及臨床意義。

近年來(lái)的研究結(jié)果顯示，焦慮癥或焦慮情緒可能與一些蛋白表達(dá)相關(guān)。但采用SELDI技術(shù)檢測(cè)焦慮患者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜的研究，尚未見公開文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是建立一種持續(xù)焦慮小鼠的特征蛋白質(zhì)指紋圖譜，以提高對(duì)于持續(xù)焦慮癥的判讀準(zhǔn)確性。

提供持續(xù)焦慮小鼠特征蛋白質(zhì)指紋圖譜的應(yīng)用，是本發(fā)明的另一發(fā)明目的。

本發(fā)明的持續(xù)焦慮小鼠特征蛋白質(zhì)指紋圖譜是應(yīng)用SELDI技術(shù)對(duì)持續(xù)焦慮小鼠血清進(jìn)行檢測(cè)，在質(zhì)荷比(M/Z)15000+H～16800+H之間產(chǎn)生的豐度≥5％的單組或雙組峰簇。

本發(fā)明在應(yīng)用SELDI技術(shù)對(duì)持續(xù)焦慮小鼠的血清進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，選擇的是CM10芯片(弱陽(yáng)離子交換芯片)。將使用CM10芯片檢測(cè)的新鮮血清和儲(chǔ)存在-80℃低溫冰箱內(nèi)的同一血清的蛋白質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行比較，未發(fā)現(xiàn)有明顯的峰值變化。CM10芯片的活性表面由弱羧基陰離子構(gòu)成，通過(guò)離子親和作用與蛋白質(zhì)分子中帶有正電荷的賴氨酸、精氨酸、組氨酸等氨基酸殘基結(jié)合，作為WCX2芯片的改進(jìn)型，在蛋白質(zhì)結(jié)合區(qū)的周圍有疏水涂層，使得蛋白質(zhì)與芯片的結(jié)合更均勻。因此本發(fā)明選擇變異性小，穩(wěn)定性和可重復(fù)性較高的CM10芯片。

本發(fā)明在應(yīng)用SELDI技術(shù)對(duì)持續(xù)焦慮小鼠的血清進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)到的蛋白質(zhì)指紋譜型的質(zhì)荷比(M/Z)下限為1+H，上限為25000+H。

本發(fā)明應(yīng)用SELDI技術(shù)對(duì)持續(xù)焦慮小鼠血清進(jìn)行檢測(cè)的具體方法是：

1)以任意一種焦慮小鼠動(dòng)物模型構(gòu)建方法構(gòu)建持續(xù)焦慮小鼠動(dòng)物模型，摘取小鼠眼球取血，靜置離心分離血清，-80℃低溫冰箱保存。

2)自-80℃冰箱中取出血清樣品，在冰浴上緩慢融解30～60min，4℃下10000rpm離心2min；向10μL?U9血清處理液中加入上述血清5μL，4℃下在搖床上600rpm振蕩30min，使充分混合，用Binding?Buffer將U9處理后的血清稀釋至200μL，4℃下在搖床上600rpm振蕩30min，用于上樣。

3)將CM10芯片放入盛有100mmol/L鹽酸的試管中，振蕩4～5min，液譜純水沖洗，將芯片安裝到Bio-processor上，每孔加200μLBinding?Buffer，室溫振蕩5min，棄掉液體，重復(fù)一次。