[發明專利]持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜及其應用

無效

• 申請號: 201010599566.2
• 申請日: 2010-12-15
• 公開（公告）號: CN102175748A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 王清馨
• 申請（專利權）人: 王清馨
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 太原華弈知識產權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

1.持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜，其特征是應用SELDI技術對持續焦慮小鼠血清進行檢測，在質荷比(M/Z)15000+H～16800+H之間產生的豐度≥5％的單組或雙組峰簇。

2.根據權利要求1所述的持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜，其特征是在應用SELDI技術對持續焦慮小鼠血清進行檢測時，使用CM10芯片。

3.根據權利要求1所述的持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜，其特征是檢測的蛋白質指紋圖譜質荷比下限為1+H，上限為25000+H。

4.持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜的構建方法，其特征是按照以下步驟進行：

1)以任意一種焦慮小鼠動物模型構建方法構建持續焦慮小鼠動物模型，摘取小鼠眼球取血，靜置離心分離血清，-80℃低溫冰箱保存；

2)自-80℃冰箱中取出血清樣品，在冰浴上緩慢融解30～60min，4℃下10000rpm離心2min；向10μL?U9血清處理液中加入上述血清5μL，4℃下在搖床上600rpm振蕩30min，使充分混合，用Binding?Buffer將U9處理后的血清稀釋至200μL，4℃下在搖床上600rpm振蕩30min，用于上樣；

3)將CM10芯片放入盛有100mmol/L鹽酸的試管中，振蕩4～5min，液譜純水沖洗，將芯片安裝到Bio-processor上，每孔加200μL?Binding?Buffer，室溫振蕩5min，棄掉液體，重復一次；

4)取上述經U9處理并稀釋過的血清100μL加到CM10芯片上，4℃下600rpm搖床上振蕩充分反應1小時后，去除樣品；

5)每孔加入200μL?Binding?Buffer，室溫下搖床上600rpm振蕩5min后除去液體，重復該過程2次，再用液譜純水200μL快速清洗1次；

6)將芯片從Bio-Processor中取出，自然干燥，每點加50％飽和SPA?0.5μL，待其自然干燥后，重復點加1次，自然干燥；

7)在SELDI-TOF閱讀器中檢測CM10芯片，設定儀器初始激光強度195，靈敏度8，檢測蛋白質分子量范圍2000～20000Da，以質荷比為橫軸、相對分子量為縱軸得到特征蛋白質指紋圖譜。

5.根據權利要求4所述的持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜構建方法，其特征是以ProteinchipSoftware3.2軟件校正原始數據，設置初始噪音過濾值5，二次噪音過濾值2，以10％為最小閾值進行聚類。

6.權利要求1所述持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜作為焦慮癥界定值的應用。

7.權利要求1所述持續焦慮小鼠特征蛋白質指紋圖譜在判別焦慮小鼠動物模型構建上的應用。