[發明專利]用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒

無效

• 申請號: 201010599558.8
• 申請日: 2010-12-22
• 公開（公告）號: CN102108413A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發明（設計）人: 韓俊領;劉志霈;周毓玲;杜宏偉;李楠;靳霞;劉蓉華
• 申請（專利權）人: 協和干細胞基因工程有限公司;天津濱海協和基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

技術領域

本發明涉及一種疾病易感性檢測用的試劑盒，尤其是一種檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，通過檢測VEGF、FV、MTHFR、APOA1、APOB和PON1基因的單核苷酸多態性位點(SNP)，來預測個體對股骨頭壞死的易感性。

背景技術

股骨頭壞死因其主要病理系股骨頭血運受阻，遭受破壞而引起的頭部骨質缺血，故多稱為股骨頭缺血性壞死或股骨頭無菌性壞死。由于股骨頭壞死有一個復雜的病理過程，如早期不能得到及時有效的治療，就會使股骨頭塌陷，關節間隙變窄，最后導致骨關節炎，使病人髖關節功能障礙而致殘致癱。病人在遭受生理病痛的同時，還要遭受心理創傷的煎熬，也給家庭、單位和社會增添了沉重的負擔。

股骨頭缺血性壞死(avascular?necrosis?of?the?femoral?head?ANFH)是骨科常見病，多發病，早期診斷困難，治療效果欠佳，最終仍需人工關節置換術，給患者和社會帶來巨大損失。其發病機理尚不十分清楚，但其共同特征都是血液循環障礙導致股骨頭缺血壞死。由于機體對壞死區具有自然的修復能力，當新生骨細胞隨新生血管向壞死區生長并形成新骨的同時，壞死骨小梁將被逐步吸收。在此過程中骨的力學性能明顯減弱，正常負重即可致股骨頭塌陷變形及髖關節退行性關節炎，同時出現以疼痛和活動障礙為主的臨床癥狀群。早期的診斷和治療是治療ANFH的關鍵。隨著ANFH的基因多態性的深入研究，越來越多的和ANFH相關的基因見諸報道。證實了多種基因在ANFH的發生發展中的作用，為ANFH的早期診斷和治療提供了理論依據。

血管內皮生長因子(vascular?endothelial?growth?factor，VEGF)基因位于6號染色體p12區，其-634上C/G多態性會影響基因的表達，其產物血管內皮生長因子能特異性作用于血管內皮細胞，促進內皮細胞分裂，促進血管的生長和側支循環建立的作用，也能促進血管內皮細胞分泌胰島素樣生長因子等生長因子，促進成骨細胞生長，其多態性會影響VEGF基因的表達，從而導致ANFH的發生。

亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR?gene)位于1p36.13，由11個外顯子組成，編碼656個氨基酸，翻譯成能夠催化N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原成N5-亞甲基四氫葉酸的蛋白質，后者為Hcy的再甲基化提供甲基供體，使其生成蛋氨酸。MTHFR基因677位存在C→T突變。該突變會導致其編碼的丙氨酸(GCU)被纈氨酸(GUU)所取代，從而影響MTHFR的活性，使血漿中HCY水平升高。是同型半胱氨酸，高同型半胱氨酸血癥是血栓形成的獨立危險因素。

凝血因子5(coagulation?factor?V，FV)基因位于1q23，編碼Glueek因子V蛋白，在凝血過程中位于內外源性凝血途徑的交匯點，加速和促進凝血酶原的激活和凝血酶的生成。因子V在rs6025發生基因突變后稱V?Leiden因子。V?Leiden因子是靜脈血栓形成的常見的危險因素。基因突變導致深靜脈血栓形成，血液高凝狀態，從而導致股骨頭小血管的血栓形成。

脂類代謝紊亂是導致股骨頭壞死的重要機理，長期大劑量使用糖皮質激素引起體內高脂血癥，脂肪分解，血中游離脂肪酸增多，從而使血管內皮損傷，膠原暴露，激活內源性凝血途徑，使纖維蛋白血小板血栓形成。

對氧磷酶(pamoxonase，PON)又稱芳香基二烷基磷酸酯酶，人類血清中的PON1與HDL緊密結合，形成一個八聚合體的結構，是ApoA一1的重要組成部分。PON基因位于染色體7q21.3一q22.1，含有9個外顯子及8個內含子，PON基因家族至少有三個成員，分別為PON1、PON2和PON3。PON1基因產物是循環中HDL的組成部分，并且HDL的抗氧化的活性大部分取決于PON1。PON1的192Glu/Arg的改變，影響了對氧磷酶酶的活性。

載脂蛋白A(apolipoprotein?A，Apo?A)位于人類l1號染色體長臂上約15kb的基因片段內，與Apo?C3、Apo?A4基因呈簇狀排列。Apo?A1基因轉錄起始點上游-75bp處有G/A多態性位點(rs670)，Apo?A1基因結構的改變影響著Apo?A1的分子結構、生成和向血液中釋放的速率，進而影響血中Apo?A1與HDL的水平。

載脂蛋白B(apolipoprotein?B，Apo?B)基因位于第2號染色體短臂(2p23)末端，全長43kb，由29個外顯子和28個內含子組成。最大的外顯子是26號外顯子。位于第26號外顯子的C7673T多態(rs693)靠近LDL受體結合區域，被認為與動脈粥樣硬化、冠心病、心肌梗死及股骨頭壞死密切相關。