[發明專利]用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒

無效

• 申請號: 201010599558.8
• 申請日: 2010-12-22
• 公開（公告）號: CN102108413A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發明（設計）人: 韓俊領;劉志霈;周毓玲;杜宏偉;李楠;靳霞;劉蓉華
• 申請（專利權）人: 協和干細胞基因工程有限公司;天津濱海協和基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

1.一種用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，其特征在于，包括：同時檢測VEGF基因的rs2010963位點、FV基因的rs6025位點、MTHFR基因的rs1801133位點、APOA1基因的rs670位點、APOB基因的rs693位點和PON1基因的rs662位點的特異性引物及對應的延伸探針，Taq酶，dNTP混合液，MgCl₂溶液，10×PCR反應緩沖液，ExoI，SAP，10×SAP反應緩沖液，Extension?Dilution?Buffer，10×Extension?Mix，DNA?polymerase，Hybridization?Solution，Hybridization?Additive，20×Wash?Buffer?1，64×Wash?Buffer2，去離子水，微陣列芯片。

2.根據權利要求1所述的用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，其特征在于：所述的特異性引物對是針對VEGF基因的rs2010963位點、FV基因的rs6025位點、MTHFR基因的rs1801133位點、APOA1基因的rs670位點、APOB基因的rs693位點和PON1基因的rs662位點而設計，能特異性擴增出包括上述SNP位點的DNA片段的引物對。

3.根據權利要求1所述的用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，其特征在于：所述的特異性延伸探針是針對VEGF基因的rs2010963位點、FV基因的rs6025位點、MTHFR基因的rs1801133位點、APOA1基因的rs670位點、APOB基因的rs693位點和PON1基因的rs662位點而設計，能通過單核苷酸延伸和微陣列技術檢測出這六個SNPs位點基因型的探針。

4.根據權利要求1所述的用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，其特征在意：所含的特異性引物對選自具有SEQ?ID?NO：1，2所示核苷酸序列的引物對、具有SEQ?ID?NO：3，4所示核苷酸序列的引物對、具有SEQ?ID?NO：5，6所示核苷酸序列的引物對、具有SEQ?ID?NO：7，8所示核苷酸序列的引物對、具有SEQ?ID?NO：9，10所示核苷酸序列的引物對以及具有SEQ?ID?NO：11，12所示核苷酸序列的引物對。

5.根據權利要求1所述的用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，其特征在于：所含的特異性延伸探針選自具有SEQ?ID?NO：13、14、15、16、17和18所示核苷酸序列的延伸探針。

6.根據權利要求1所述的用于檢測股骨頭壞死易感性的試劑盒，其特征在于：試劑盒的組分和含量包含250ul?10×PCR反應緩沖液，20ul?10mM?dNTP混合液，450ul?25mM?MgCl₂溶液，45ul?5U/ul?Taq?DNA聚合酶，50ul每條10uM的12條特異性引物混合液，15ul每條10uM的6條特異性延伸探針混合液，90ul10U/ul?ExoI，450ul?1U/ul?SAP，140ul?10×SAP反應緩沖液，1700ulExtension?Dilution?Buffer，90ul?10×Extension?Mix，10ul?DNApolymerase，3500ul?Hybridization??Solution，200ul?Hybridization?Additive，2500ul?20×Wash?Buffer?1，800ul?64×Wash?Buffer?2，去離子水20ml，一個供380人份檢測應用的384孔12重微陣列芯片，試劑盒保存溫度為-20℃。