[發明專利]一種抗三聚氰胺單克隆抗體及檢測三聚氰胺的試劑盒

有效

• 申請號: 201010595881.8
• 申請日: 2010-12-20
• 公開（公告）號: CN102168071A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 薛峰;蔣原;吳艷濤;高海崗;張睿;李旭輝;陶宏錦;張小榮;劉秀梵;趙紅霞
• 申請（專利權）人: 江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心;江蘇中測檢測服務有限公司;揚州大學;蘇州艾瑞德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/18
• 分類號: C12N5/18;C07K16/18;G01N33/577
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 王荷英

1.一種產生抗三聚氰胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其保藏號為CGMCCNo.4303，分類命名為三聚氰胺特異性淋巴細胞雜交瘤株B-4B5-F10-B11。

2.一種制備權利要求1所述產生抗三聚氰胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)制備6碳三聚氰胺-載體蛋白藕聯物，所述載體蛋白為鑰孔嘁血藍蛋白、牛血清蛋白或卵清蛋白，所述6碳三聚氰胺的結構如下：

(2)動物免疫

以步驟1所述6碳三聚氰胺-載體蛋白藕聯物為免疫原免疫小鼠，取免疫后小鼠的血清，檢測該血清抗三聚氰胺的效價和抑制價，選取效價和抑制價最高的免疫小鼠；

(3)細胞融合

取步驟(2)所得免疫小鼠的脾臟細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行細胞融合，培養；

(4)雜交瘤細胞株的篩選

檢測各融合細胞培養后的上清液的抗體效價及抑制價，選取抗體效價及抑制價最高的命名為三聚氰胺特異性淋巴細胞雜交瘤株B-4B5-F10-B11。

3.一種由權利要求1所述雜交瘤細胞株分泌的抗三聚氰胺單克隆抗體。

4.一種權利要求3所述雜交瘤細胞株分泌的抗三聚氰胺單克隆抗體的制備方法，包括如下步驟：

(1)腹水的制備：將所述雜交瘤細胞株注入baleb/c雌性小鼠腹腔，5-7后天產生腹水；取腹水上清；

(2)抗三聚氰胺單克隆抗體的純化：

初步純化：所述腹水上清經飽和硫酸胺沉淀，取沉淀溶解后透析，獲得抗三聚氰胺單克隆抗體粗品；

Protein?G親和層析純化：將抗三聚氰胺單克隆抗體粗品經Protein?G親和層析柱進行純化，收集吸收峰，即為抗三聚氰胺單克隆抗體。

5.一種權利要求3所述抗三聚氰胺單克隆抗體應用于三聚氰胺的定性或定量檢測。

6.一種利用權利要求3所述抗三聚氰胺單克隆抗體檢測三聚氰胺的試劑盒，其特征在于該試劑盒的組成如下：

(1)用6碳三聚氰胺-OVA藕聯物的碳酸鹽緩沖液包被過的酶標板；

(2)HRP標記的抗三聚氰胺單克隆抗體溶液；

(3)TMB顯色劑：TMB濃度是0.3g/L；

(4)終止液：濃度為2M的H₂SO₄；

(5)三聚氰胺標準液：濃度分別為0，0.5，1.5，4.5，13.5，40.5μg/L的三聚氰胺標準液；

(6)20倍濃縮洗液：濃度為0.2M，pH為7.4的PBST。