[發明專利]一種納米流感病毒檢測試紙

無效

• 申請號: 201010595328.4
• 申請日: 2010-12-20
• 公開（公告）號: CN102072956A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 魏啓明
• 申請（專利權）人: 重慶市科學技術研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/544;G01N33/532
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所 50211
• 代理人: 郭云

技術領域

本發明涉及一種檢測試紙，具體的說是一種納米流感病毒檢測試紙。

背景技術

快速早期診斷各種病毒感染,對于早期預防和治療急性傳染病非常重要。目前國內外對于病毒感染的早期診斷還沒有一種有效和快速的方法，用分子生物學的方法，包括EILSA方法，影像學診斷等等,均沒有達到快速診斷的目的,所以現在國內和國際上急需開發出一種高效的和快速的方法診斷各種病毒感染。

另外，目前的檢測試紙主要由PVC底板、加樣孔、結合墊、硝酸纖維膜和吸水墊組成,在硝酸纖維膜上僅點有帶狀或線狀的1條目的物檢測抗體，只能用于檢測一種病毒，檢測效率低，不適合快速檢測多種病毒。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種納米流感病毒檢測試紙，可以同時檢測三種流感病毒。

本發明的技術方案如下：一種納米流感病毒檢測試紙，包括PVC底板，在PVC底板上表面鋪有結合墊，在結合墊的左邊設置加樣孔，右邊依次粘貼硝酸纖維膜和吸水墊，所述硝酸纖維膜上從左到右依次設有線狀或帶狀的三條抗體檢測線和β-肌動蛋白檢測抗體控制線，所述結合墊由玻璃纖維膜組成，在玻璃纖維膜上均勻附著有黑色、藍色、和橙色的納米膠體金復合微粒，所述納米膠體金復合微粒的粒徑為20-80nm，其中黑色納米膠體金復合微粒上分別偶聯三種抗目的物檢測抗體，藍色納米膠體金復合微粒上偶聯AMACR抗原,橙色納米膠體金復合微粒上偶聯抗β-肌動蛋白抗體作為內參。

采用上述技術方案，使用納米膠體金復合微粒為載體偶聯不同抗體,可同時檢測３種病毒,建立一個多價生物標志物分子檢測系統,在靈敏度和特異性上都有很大的提高,?利用納米復合微粒將定位沉積部位進行顯色加強，提高了反應靈敏、點樣簡便、試紙保存期長，適用于基層，實驗室及現場檢測，利用本發明檢測流感病毒的靈敏度為96.8%以上,特異性為95.6%以上。

在上述技術方案中：所述三條檢測抗體檢測線為普通流感病毒檢測抗體檢測線、禽流感病毒檢測抗體檢測線、甲型流感病毒檢測抗體檢測線以及β-肌動蛋白檢測抗體控制線，所述三種抗目的物抗體為普通流感病毒檢測抗體、禽流感病毒檢測抗體和甲型流感病毒檢測抗體。這樣可以實現同時檢測是否含有普通流感病毒或禽流感病毒或甲型流感病毒。

在上述技術方案中：所述PVC底板為長為10cｍ、寬為4cｍ的矩形聚乙烯塑料片，所述硝酸纖維膜長為長為8cｍ、寬為3cm、厚度為0.1mm、平均孔徑為5um的微多孔硝酸纖維素膜片。

在上述技術方案中，用磷酸鹽緩沖液分別稀釋３種流感病毒的多克隆抗體，即普通流感病毒多克隆抗體、禽流感病毒多克隆抗體和甲型流感病毒多克隆抗體，使溶液中多克隆抗體重量百分比濃度為0.05-0.3mg/ml，制得普通流感病毒多克隆抗體溶液、禽流感病毒多克隆抗體溶液和甲型流感病毒多克隆抗體溶液；然后用點膜器將上述普通流感病毒多克隆抗體溶液、禽流感病毒多克隆抗體溶液和甲型流感病毒多克隆抗體溶液以3μL/cm分別在硝酸纖維膜上依次點成線狀或帶狀的普通流感病毒檢測抗體檢測線、禽流感病毒檢測抗體檢測線和甲型流感病毒檢測抗體檢測線。

在上述技術方案中：所述納米膠體金復合微粒上必須含有可供偶聯的免疫配基:羧基,羥基,氨基或醛基，先用無水嗎啉乙磺酸對納米膠體金復合微粒進行預處理,將少量的碳化二亞胺和N－羥基琥鉑酰亞胺加入到微球溶液中,在震蕩器上震蕩活化納米膠體金復合微粒；用黑色納米膠體金復合微粒分別偶聯普通流感病毒檢測抗體、禽流感病毒檢測抗體和甲型流感病毒檢測抗體，藍色納米膠體金復合微粒偶聯AMACR抗原,用橙色納米膠體金復合微粒偶聯抗β-肌動蛋白抗體作為內參;然后將三種免疫納米膠體金復合微粒表面沒有完全反應的活化基團進行封閉，以降低在以后試驗中可能發生的非特異性吸附；再將微球重懸在保護液中,制成濃度為2mg/ml的微球溶液進行保存,保存液的配方為:pH9.0,含0.05%Tween-20,0.1%NaN₃和0.1%BSA的0.005M硼酸鹽緩沖體系；最后將黑,藍和橙三種彩色免疫納米膠體金復合微粒等質量混合制成一種黑藍橙三色混合免疫納米膠體金復合微粒；用移液搶將10-40微升，濃度為為2mg/ml的納米膠體金復合微粒滴在玻璃纖維膜上，然后干燥得到結合墊。

有益效果：本產品具有高效，快速，便宜，便利，容易使用，便于運輸及保存，無毒性，可在同一個試紙上同時快速診斷三種病毒等優點，因此具有較強的競爭優勢。與現有的技術相比，這種新型納米快速診斷試紙的靈敏度和特異性在90%以上。

附圖說明

圖1為本發明的結構示意圖。