[發明專利]一種建立新疆雪蓮高效液相色譜指紋圖譜的方法

有效

• 申請號: 201010594307.0
• 申請日: 2010-12-19
• 公開（公告）號: CN102565257A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 穆青;蘇倩;王新宇;饒峰;胡雪梅;黃靜
• 申請（專利權）人: 新疆天山蓮藥業有限公司;復旦大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;A61K36/285
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴

1.一種建立新疆雪蓮高效液相色譜指紋圖譜的方法，其特征在于，對雪蓮藥材中特征成分倍半萜類化合物用色譜技術進行分離，通過波譜方法確定它們的成分，并以其作為標識物質對新疆雪蓮的藥材的提取物建立液相色譜指紋圖譜，其包括步驟：

步驟一?確定標準物質分離方法

正相硅膠色譜法?300-400目，硅膠H，反相硅膠色譜法RP-18，凝膠色譜法或溶解度分離法；

步驟二?確定標準物質鑒定方法

其中，

核磁共振方法：

Varian?Mercury?Plus?400MHz?超導核磁共振波譜儀,?樣品溶于氘代試劑中測定¹H?NMR,?¹³C?NMR,?DEPT,?二維譜，解析圖譜結合其它波譜數據，確定化合物結構；

質譜方法：

質譜：HRMALDIMS用IonSpec?4.7?Tesla?FTMS型質譜儀測定；ESIMS用Agilent?1100?Series?LC/MSD?G1946D?型質譜儀；

X-射線單晶衍射方法：

化合物0.20?x?0.15?x?0.12?mm?無色棱狀結晶體的單晶置于?Bruker?Smart?Apex?CCD?型衍射儀上，用石墨單色化的?Mo?Kα?(λ?=?0.71073??)輻射為光源，在27.00°?≥?θ?≥?2.08°?范圍內，以?ω/?2θ?掃描方式，共收集衍射點數為3676，獨立衍射點數?3676，[R(int)?=?0.0000]，完整度為?99.4%，優化方法基于?F²?全矩陣最小二乘法，衍射區為?-9?≤?h≤?9,?0?≤?k?≤?14，?0?≤?l?≤?22，最后修正值?R1?=?0.0488，?wR2?=?0.1184，R?(all?data):?R1?=?0.0655，wR2?=?0.1280，GOF?=?1.039；其晶體學數據：C₃₈H₄₈O₄,?MW?=?568.76；?單斜晶系，?空間群：P2₁；a?=?7.789(3)??，b?=?11.713(4)??，?c?=?17.834(7)??；?α?=?90°，?β=?95.680(6)°，?γ?=?90°，?V?=?1619.0(11)??³；T?=?293(2)?K；Z?=?2；?D_calc?=?1.167?g/cm^?3；?F(000)?=?616；

步驟三?樣品的提取及測定

稱取新疆雪蓮藥材全草，剪碎，65%乙醇浸泡過夜，超聲萃取40min兩次，濃縮，乙酸乙酯超聲萃取30?min兩次，，合并，濃縮，用甲醇配制成供試品溶液，0.45?μm有機相針式濾器過濾后取濾液進行色譜分析；

色譜條件：

流動相：乙腈-水二元梯度洗脫，梯度條件：水(A)?-乙腈(B):（0-10min）8%B，（20min）20%B，（40-50min）35%B，（53min）60%B，（70-75min）100%B；色譜柱：Agilent?Eclipse?XDB-C18,?5?μm,?4.6×250?mm，紫外光檢測，檢測波長：200?nm；柱溫25?℃，流速1.0?mL·min^-1；

樣品測定：精密吸取供試品10?μL進樣分析，記錄時間為75?min；

高效液相色譜指紋圖譜通過標準物質指定色譜峰。

2.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟三的高效液相色譜條件中：Agilent1200液相色譜儀；流速1?ml/min；進樣量10?μl；檢測波長200?nm；洗脫條件：水/乙腈?0-75?分鐘梯度洗脫，水：乙腈92-8?至水：乙腈0-100。

3.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雪蓮藥材用65%酒精70攝氏度提取。

4.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟三的高效液相色譜指紋圖譜通過標準物質指定6個色譜峰。