[發(fā)明專利]快速檢測人腸道病毒71型的熒光定量PCR試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010592659.2
• 申請日: 2010-12-17
• 公開（公告）號: CN102108422A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王業(yè)富;唐景峰;汪曉莉;楊敬鏡;王維旭
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢百泰基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

1.一種快速檢測人腸道病毒71型熒光定量PCR試劑盒，其特征在于包括：

RNA提取液、熒光定量PCR反應(yīng)液、EV71標(biāo)準(zhǔn)陽性模板PMD18-T-EV71和陰性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；

所述的熒光定量PCR反應(yīng)液含有人腸道病毒71型特異性引物對和熒光探針；

正向引物為5′-GCCCAATYACAGCCTATYATAATAGC-3′，

反向引物為5′-TACARTCTGCCYACCCTARTCTC-3′，

其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸10個堿基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸10個堿基；

熒光探針序列為5′-CTAGCGGCAGCCCAAA-3′，該熒光探針序列可向5’和3’端方向各延伸10個堿基，熒光探針5′端標(biāo)記報告熒光基團(tuán)FAM，3′端標(biāo)記不發(fā)光的淬滅基團(tuán)標(biāo)記Eclipse，可以大大減少背景噪音的干擾，標(biāo)準(zhǔn)陽性模板PMD18-T-EV71是含有人腸道病毒71型VP1基因的124個堿基對的核苷酸片段構(gòu)成的PMD18-T載體，該載體可在大腸桿菌DH5α中增殖。

2.按權(quán)利要求1所述的PCR試劑盒，其特征在于EV71標(biāo)準(zhǔn)陽性模板PMD18-T-EV71包含的VP1基因片段的核苷酸序列為：

GCCCAATACAGCCTATATAATAGCACTAGCGGCAGCCCAAAAGAACTTCACTATGAAATTGTGCAAGGATGCTAGTGATATCCTGCAGACGGGCACCATCCAGGGAGATAGGGTGGCAGATGTA。

3.按權(quán)利要求1所述的PCR試劑盒，其特征在于陰性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品為：

無菌雙蒸水。

4.按權(quán)利要求1所述的PCR試劑盒的制備方法，其特征在于包括下列步驟：

①配制RNA提取液；

②配制熒光定量PCR反應(yīng)液；

③配制EV71標(biāo)準(zhǔn)陽性模板PMD18-T-EV71；

④配制陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品；

⑤配制陰性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；

⑥判斷未知樣本的陰陽性。