[發(fā)明專利]一種用于聯(lián)合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010592345.2
• 申請日: 2010-12-15
• 公開（公告）號: CN102141569A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發(fā)明（設計）人: 陳家旭;艾琳;陳木新;郭儉;陳韶紅;蔡玉春;張永年;李浩;田利光;張玲玲;朱興全
• 申請（專利權(quán)）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 上海世貿(mào)專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，尤其涉及一種蛋白質(zhì)芯片，具體來說是一種用于聯(lián)合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片。

背景技術(shù)

生物芯片技術(shù)是九十年代中期興起的一種新型生物學技術(shù)，它基于生物大分子(核酸、蛋白質(zhì)等)間相互作用的大規(guī)模并行分析方法，并結(jié)合微電子、微機械、化學、物理、計算機等多領(lǐng)域的技術(shù)，將生命科學研究中所涉及的樣品反應、檢測、分析等過程連續(xù)化、集成化、微型化，已成為當今生命科學研究領(lǐng)域發(fā)展最快的技術(shù)之一。生物芯片可以廣泛應用于農(nóng)業(yè)、環(huán)境、食品、法庭、軍事、科研等領(lǐng)域。不僅如此，由于生物芯片可同時檢測多種疾病相關(guān)基因或蛋白，從而對遺傳病、腫瘤、傳染性疾病進行輔助診斷，所以它還具有重要的臨床應用價值。

生物芯片主要分為三大類：核酸芯片、蛋白芯片和芯片實驗室。蛋白芯片是檢測蛋白質(zhì)之間相互作用的生物芯片。蛋白芯片可通過發(fā)現(xiàn)體內(nèi)特定蛋白質(zhì)的含量變化，準確地對生理/病理變化作出判斷。在臨床診斷領(lǐng)域，蛋白芯片具有廣泛的應用前景。

隨著人們生活水平的不斷提高，對生鮮食品的不斷追求，我國食源性寄生蟲病例，特別是華支睪吸蟲病、衛(wèi)氏并殖吸蟲病等，也在不斷攀升。另，局部疫區(qū)的血吸蟲病仍然很嚴重，隨著經(jīng)濟的發(fā)展，人口的流動也越來越大，血吸蟲病人也漸漸分布在全國各地。因此，對此這些吸蟲病的診斷顯得尤為重要。常規(guī)的對這幾種吸蟲的的診斷主要依靠臨床癥狀、流行病史、實驗室檢查等進行綜合判斷。但往往有時同一器官或同一癥狀，均可這3種吸蟲寄生引起，而在感染程度較輕時，不一定能從糞便中找到蟲卵進行確診鑒定。

因此，研制一種可滿足快速、高效及高通量檢測要求的同時鑒別檢測三種吸蟲的方法，對我們更好地控制此三種吸蟲病具有巨大推動作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于聯(lián)合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，所述的這種用于聯(lián)合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片要解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測吸蟲病只能耽擱檢測，方法繁瑣、檢測時間長的技術(shù)問題。

本發(fā)明的這種用于聯(lián)合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，由一個固相載體構(gòu)成，所述的固相載體上固定有華支睪吸蟲抗原、衛(wèi)氏并殖吸蟲抗原和血吸蟲抗原，所述的華支睪吸蟲抗原、衛(wèi)氏并殖吸蟲抗原和血吸蟲抗原呈矩陣式排列。

具體的，所述的固相載體為硅片、載玻片或者尼龍膜。

進一步的，所述的華支睪吸蟲抗原為華支睪吸蟲粗抗原、純化后的天然抗原蛋白片段或重組表達抗原。

進一步的，衛(wèi)氏并殖吸蟲抗原為衛(wèi)氏并殖吸蟲粗抗原、純化后的天然抗原蛋白片段或重組表達抗原。

進一步的，所述的血吸蟲抗原為血吸蟲粗抗原、純化后的天然抗原蛋白片段或重組表達抗原。

進一步的，所述的固相載體上還固定有陰性反應對照，所述的陰性反應對照物為點樣的緩沖液。

進一步的，所述的點樣的緩沖液為pH值在9.0-10.0之間的碳酸鹽緩沖液，具體為NaHCO₃-Na₂CO₃緩沖液。

進一步的，所述的固相載體上還固定有陽性反應對照，所述的陽性反應對照物為羊抗人IgG或者羊抗人IgM。

進一步的，所述的固相載體上還固定有質(zhì)量控制對照物，所述的質(zhì)量控制對照物熒光素標記的羊抗人IgG或者熒光素標記的羊抗人IgM。

進一步的，所述的熒光素標記物為異硫氰酸熒光素或花青類。

本發(fā)明還提供了上述蛋白芯片的制備方法，所述的制備方法包括如下步驟：

1)將有華支睪吸蟲抗原、衛(wèi)氏并殖吸蟲抗原和血吸蟲抗原探針分別溶于pH值為9.0-10.0的碳酸鹽緩沖液中，然后用芯片自動點樣系統(tǒng)將蛋白質(zhì)點制在固相載體上，點樣密度為16-200點/cm²，點樣量為0.1-10ng/點；

2)2-8℃放置過夜固定；

3)用封閉液將蛋白芯片的未點樣部位封閉并凍干處理，2-8℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

進一步的，所述的封閉液中含有TBS溶液和質(zhì)量百分比為1-9％的蔗糖、質(zhì)量百分比為1-9％的牛血清白蛋白(BSA)、質(zhì)量百分比為0.05-0.2％的Tween?20、質(zhì)量百分比為0.05-0.3％的酪氨酸、質(zhì)量百分比為0.2-1％NaN₃，其中TBS含有質(zhì)量百分比為0.8-0.9％NaCl和質(zhì)量百分比為1.1-1.5％Tris。

本發(fā)明的原理是：蛋白芯片是一種將大量的吸蟲抗原蛋白分子有規(guī)律地固定在某種固相介質(zhì)上，利用蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)、酶和底物以及蛋白質(zhì)與其他分子間的相互作用進行檢測分析的一項技術(shù)，是生物芯片的重要組成部分。