[發明專利]一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片及其制備方法

無效

• 申請號: 201010592345.2
• 申請日: 2010-12-15
• 公開（公告）號: CN102141569A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 陳家旭;艾琳;陳木新;郭儉;陳韶紅;蔡玉春;張永年;李浩;田利光;張玲玲;朱興全
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

1.一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，由一個固相載體構成，其特征在于：所述的固相載體上固定有華支睪吸蟲抗原、衛氏并殖吸蟲抗原和血吸蟲抗原，所述的華支睪吸蟲抗原、衛氏并殖吸蟲抗原和血吸蟲抗原呈矩陣式排列。

2.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的華支睪吸蟲抗原為華支睪吸蟲粗抗原、純化后的天然抗原蛋白片段或重組表達抗原。

3.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：衛氏并殖吸蟲抗原為衛氏并殖吸蟲粗抗原、純化后的天然抗原蛋白片段或重組表達抗原。

4.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的血吸蟲抗原為血吸蟲粗抗原、純化后的天然抗原蛋白片段或重組表達抗原。

5.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的固相載體上還固定有陰性反應對照，所述的陰性反應對照物為點樣的緩沖液。

6.如權利要求5所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的點樣的緩沖液為pH值在9.0-10.0之間的碳酸鹽緩沖液。

7.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的固相載體上還固定有陽性反應對照，所述的陽性反應對照物為羊抗人IgG或者羊抗人IgM。

8.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的固相載體上還固定有質量控制對照物，所述的質量控制對照物為熒光素標記的羊抗人IgG或者熒光素標記的羊抗人IgM。

9.如權利要求8所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片，其特征在于：所述的熒光素標記物為異硫氰酸熒光素或花青類。

10.權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

1)將有華支睪吸蟲抗原、衛氏并殖吸蟲抗原和血吸蟲抗原探針分別溶于pH值為9.0-10.0的碳酸鹽緩沖液中，然后用芯片自動點樣系統將蛋白質點制在固相載體上，點樣密度為16-200點/cm²，點樣量為0.1-10ng/點；

2)2-8℃放置過夜固定；

3)用封閉液將蛋白芯片的未點樣部位封閉并凍干處理，2-8℃貯存備用。

11.如權利要求1所述的一種用于聯合診斷三種吸蟲病的蛋白芯片的制備方法，其特征在于：所述的封閉液中含有TBS溶液和質量百分比為1-9％的蔗糖、質量百分比為1-9％的牛血清白蛋白、質量百分比為0.05-0.2％的Tween?20、質量百分比為0.05-0.3％的酪氨酸、質量百分比為0.2-1％NaN₃，其中TBS含有質量百分比為0.8-0.9％NaCl和質量百分比為1.1-1.5％Tris。