[發明專利]一種簡易的卵母細胞體外成熟培養方法

無效

• 申請號: 201010590647.6
• 申請日: 2010-12-16
• 公開（公告）號: CN102154198A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 雷安民;趙貴民;吳蘇君;劉文強;井勇;楊文琳;高志敏
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種簡易的卵母細胞體外成熟培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

A1卵母細胞的收集：從屠宰場收集性成熟牛卵巢，抽吸法采集卵丘卵母細胞復合體，挑選胞質均勻并有3層以上卵丘細胞緊密包圍的卵丘卵母細胞復合體用于體外成熟培養；

A2密閉氣袋的制備及卵母細胞的體外成熟培養：將培養有卵丘卵母細胞復合體的四孔板小心置入塑料袋，該塑料袋由避光耐熱無毒塑料制成，寬約15cm、長約20cm，一端開口，初步封口，封口處留通氣口，通過輸氣導管向袋內吹入人體呼出氣體，輸氣導管帶有0.22μm的微孔濾膜濾器，吹滿后排出，如此反復進行3～4次，確保氣袋內的空氣完全被人體呼出的混合氣體替代，然后將氣袋完全封閉，置于38.5℃生化培養箱中培養22～24h，挑選排出第一極體的成熟卵，繼續培養；

A3卵母細胞的孤雌激活及體外培養：在體外成熟培養第28h，化學方法孤雌激活，然后在卵裂培養液中培養3d，囊胚培養液中培養4d，7～9d后觀察統計囊胚率；所述孤雌激活、卵裂培養、囊胚培養均在密閉氣袋、38.5℃生化培養箱中進行。