[發明專利]尾葉桉遺傳轉化與再生的方法

無效

• 申請號: 201010589838.0
• 申請日: 2010-12-09
• 公開（公告）號: CN102168105A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 曾富華
• 申請（專利權）人: 湛江師范學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00
• 代理公司: 湛江市三強專利事務所 44203
• 代理人: 龐愛英

技術領域

本發明屬于桉樹遺傳轉化與再生方法，特別是關于尾葉桉的遺傳轉化與再生。

背景技術

桉樹(Eucalyptus)屬桃金娘科(Mytacea)，桉屬(Eucalyptus)，原產于澳大利，現有1000多個種及亞種。桉樹具有許多顯著的特點：①材質堅硬，材、皮、葉、花的經濟價值都很高，既是用材林、經濟林、防護林、風景林，又是很好的能源樹種；②繁殖容易，速生豐產，特別是幼林期生長快，大大縮短了生產周期，能獲得更高的經濟效益；③種類多，抗逆性強，既有耐熱樹種，也有耐寒樹種，病蟲害少，較耐瘦瘠，可在不同氣候帶栽植。桉樹的木材是造紙、造船的良材，葉子可提油料，樹皮可提樹脂，殘渣培養食用菌后還可當肥料，花是良好的蜜源。正因桉樹有上述用途，加之生態適應性廣、速生、抗逆性強、用途廣泛等優點，已被世界熱帶、亞熱帶地區廣泛引種栽培。目前全世界有100多個國家種植桉樹，種植面積超過2000萬公頃，桉樹已經成為短周期原料林的主要樹種。

我國最早引種是1890年，零星引種在城市公園，鐵路邊等四旁綠化場地。真正大規模系統地開展引種和推廣栽培始于20世紀50年代的雷州半島。80年代初，澳大利亞援助中國在廣西東門林場開展桉樹系統引種和育種實驗，引進了174個桉樹品系和種源，建立了樹木園和桉樹良種基因庫。現在，桉樹已經成為我國南方地區發展速生豐產林的戰略樹種。目前桉樹廣泛栽種于我國從東海之濱到云貴高原的廣大地區。據不完全統計，我國現有桉樹人工林總面積達到200萬公頃，并正以每年10萬公頃的速度增長。

桉樹生長周期長，而且遺傳性高度雜合，應用常規的育種方法育種周期長，利用基因工程手段可打破種間雜交不親和的界限。利用基因工程進得桉樹轉基因育種的前提是建立桉樹組織培養再生系統與遺傳轉化的受體系統。從20世紀60年代以來，植物細胞的全能性，在理論上和實踐上都得到了充分的論證，植物組織培養進入了迅速發展時期，桉樹某些品種的組織培養也于20世紀60年代逐漸開始。迄今為止，已有60多種桉樹的組織培養獲得成功，絕大部分是國外首先取得成功。Hatney用簡單的培養基在普通家用冰箱中保存鈍蓋赤桉(E.camaldulensis)和巨桉(E.grandis)裸芽培養物達8個月之久；Bachelard和Stowe用一種含14％椰子汁的液體培養基保存實生苗的根系，根冠部分可以接種在同種培養基上，但沒有芽的再生；Sussex由赤桉(E.camaldulenses)實生苗外植體獲得了愈傷組織；Aneja等由檸檬桉(E.citriodora)木質塊莖的愈傷組織誘導出小植株；Kitahara等人從白桉(E.alba)的下胚軸培養產生愈傷組織并分化形成了小植株；De?Fossard等人從榕葉桉(E.ficifolia)的莖節離體培養，能繁育大量苗木；LakshmiSita發現，從檸檬桉子葉愈傷組織誘導再生芽的條件為：0.2mg/L?IAA和1mg/L?ZT以及光周期12小時的熒光燈光照，這些芽能在只含有生長素的培養基上形成根；P.K.Gupta等人用組織培養法無性繁殖檸檬桉，并于1981年用成年檸檬桉樹嫩枝莖段誘導出了完整植株；S.Kondas將一棵20年生的桉樹成功培養出芽；Adam將岡尼桉(E.gunnii)的離體根培養在不含激素的MS固體培養基上，但沒有分化成芽；Qin和Kirby用葡萄桉(E.botryoides)、鄧恩桉(E.dunnii)、巨桉(E.grandis)和野桉(E.rudis)幼苗的子葉、下胚軸以及成年巨桉(E.grandis)優良無性系的幼葉為材料誘導出類似胚狀體的結構。此后更有不少相關報道，E.tereticornis、E.grandis、E.Urophylla、E.Globulus、E.grandis×E.uropHylla等樹種已能經器官發生途徑再生。E.Citriodora、E.Grandis和E.dunnii等樹種已能經體細胞胚胎發生途徑再生。