[發(fā)明專利]μ-芋螺毒素-KIIIA的基因工程制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201010588812.4 | 申請(qǐng)日： | 2010-12-15 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN102154257A | 公開（公告）日： | 2011-08-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李暉;董欽;李鳳蘭;管薈苓;李金波;馬健慧;趙雪嬌;蔣倩倩 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 哈爾濱醫(yī)科大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/09 | 分類號(hào)： | C12N15/09;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139 | 代理人： | 孫皓晨;余光軍 |
| 地址： | 150081 黑龍*** | 國(guó)省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 毒素 kiiia 基因工程 制備 方法 | ||
1.一種μ-芋螺毒素--KIIIA的基因工程制備方法，包括：將μ-芋螺毒素KIIIA基因插入帶有Trx-tag的原核表達(dá)載體構(gòu)建得到重組原核表達(dá)載體；將所述的重組原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌(E.Coli)，IPTG誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)；收集并純化所表達(dá)的蛋白，即得。
2.按照權(quán)利要求1所述的基因工程制備方法，其特征在于：所述的μ-芋螺毒素-KIIIA基因是通過合成單鏈DNA序列，形成雙鏈目的DNA序列而獲得的。
3.按照權(quán)利要求1所述的基因工程制備方法，其特征在于：所述的帶有Trx-tag的原核表達(dá)載體為pET-32a(+)。
4.按照權(quán)利要求1所述的基因工程制備方法，其特征在于：所述大腸桿菌(E.Coli)是大腸桿菌Origami2(DE3)。
5.按照權(quán)利要求1所述的基因工程制備方法，其特征在于：IPTG誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)的條件是OD600＝1.0。
6.按照權(quán)利要求1所述的基因工程制備方法，其特征在于：所述誘導(dǎo)時(shí)間為20小時(shí)。
7.按照權(quán)利要求1所述的基因工程制備方法，其特征在于，所述的蛋白的純化方式包括：將重組蛋白上Ni-NTA瓊脂糖樹脂親和層析，收集洗脫峰，用Sephadex?G25凝膠過濾除鹽，即得。
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