[發(fā)明專利]篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010586592.1
• 申請日: 2010-12-13
• 公開（公告）號: CN102533824A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫美藝;劉慶軍;韓化敏;劉小立
• 申請（專利權(quán)）人: 北京表源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/86;C12Q1/04
• 代理公司: 北京連和連知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11278
• 代理人: 賀小明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種載體系統(tǒng)，尤其涉及一種篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)。

背景技術(shù)

生物素與親和素之間的高親和力得到了科研工作者的特別關(guān)注，其在生物領(lǐng)域具有非常廣泛的應用。在分子生物學中，生物素(Biotin，VitaminH)與親和素(Avidin)之間的非共價作用可以說是非常強，而且很特異。親和常數(shù)達到10¹⁴～10¹⁵M^-1，它比典型的抗原抗體結(jié)合常數(shù)高幾個數(shù)量級。蛋白-配基間的相互作用中，生物素與親和素的作用可以說是最強的，所以它在蛋白純化、免疫組化、靶向藥物、靶向蛋白和基因治療載體等領(lǐng)域具有廣泛的應用。另外，反轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體在基因治療上越來越顯示出其它傳統(tǒng)基因遞送載體無法比擬的優(yōu)越性。為了達到更好的基因治療的目的，在一個慢病毒遞送載體上可以裝載2～3個目的基因的表達盒(cassette)，在同一個靶細胞中同時表達2～3個基因。核糖體進入位點IRES可以在一個啟動子作用下表達兩個目的基因(Chantret?I，DupreT，Delenda?C，et?al.Congenital?disorders?of?glycosylationtype?Ig?is?defined?by?a?deficiency?indolichyl-P-mannose：Man7GlcNAc2-PP-dolichyl?mannosyltransferase.JBiol?Chem，2002.277(28).25815-25822.；Chantret?I，Dancourt?J，Dupre?T，et?al.A?deficiency?in?dolichyl-P-glucose：Glc1Man9GlcNAc2-PP-dolichyl?alpha3-glucosyltransferase?defines?anew?subtype?of?congenital?disorders?of?glycosylation.J?Biol?Chem，2003.278(11).9962-9971)。

來源于反轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和小皰疹病毒的用于基因治療病毒載體被廣泛的研究和應用。在當今世界，超過70％的臨床基因治療使用這些病毒載體。而且80％臨床基因治療實驗使用反轉(zhuǎn)錄病毒載體，所以此病毒載體的使用意味著該該載體是一種最有前途的基因遞送系統(tǒng)(Miller?N?and?VileR.Targeted?vectors?for?gene?therapy.FASEB?J，1995.9(2).190-199；Vile?RG，Diaz?RM，Miller?N，et?al.Tissue-specific?gene?expression?from?Mo-MLVretroviral?vectors?with?hybrid?LTRs?containing?the?murine?tyrosinaseenhancer/promoter.Virology，1995.214(1).307-313；Vile?RG?and?Russell?SJ.Retroviruses?as?vectors.Br?Med?Bull，1995.51(1).12-30.)。與病毒載體相比，非病毒載體具有安全、操作簡便、無免疫原性、易于大規(guī)模生產(chǎn)和DNA包裝的優(yōu)點(El-Aneed?A.Current?strategies?in?cancer?gene?therapy.Eur?JPharmacol，2004.498(1-3).1-8；El-Aneed?A.An?overview?of?currentdelivery?systems?in?cancer?gene?therapy.J?Control?Release，2004.94(1).1-14.)。這些非病毒基因遞送系統(tǒng)一般是以裸DNA或者由DNA質(zhì)粒與肽或脂質(zhì)體形成的陽離子體的形式進入靶細胞。在早期的臨床實驗中，基因替換、免疫修飾和“自殺”基因治療的治療策略已經(jīng)取得了令人振奮的結(jié)果。但非病毒載體仍存在著與病毒載體不可比擬的缺點(Schatzlein?AG.Non-viral?vectors?in?cancer?gene?therapy：principles?and?progress.AnticancerDrugs，2001.12(4).275-304)，比如在細胞傳代過程中，目的基因丟失的可能性非常大，從而造成基因不能長效表達。