[發(fā)明專利]篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010586592.1
• 申請日: 2010-12-13
• 公開（公告）號: CN102533824A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 孫美藝;劉慶軍;韓化敏;劉小立
• 申請（專利權(quán)）人: 北京表源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/86;C12Q1/04
• 代理公司: 北京連和連知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11278
• 代理人: 賀小明

1.一種篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于，包含：具有攜帶生物素化酶基因表達盒的第一表達載體，具有攜帶生物素化酶底物與跨膜蛋白基因表達盒的第二表達載體，以及位于第一表達載體和/或第二表達載體上的目的基因表達盒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于，包含具有攜帶真核表達啟動子的生物素化酶基因表達盒的第一表達載體，具有攜帶真核表達啟動子的生物素化酶底物與跨膜蛋白基因表達盒的第二表達載體，以及位于第一表達載體和/或第二表達載體上的目的基因表達盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于，所述第一表達載體和/或第二表達載體為慢病毒載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于，所述慢病毒載體為載體LL3.7。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于，所述外源基因表達細胞包括動物細胞、植物細胞或真菌細胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于所述的生物素化酶是BirA酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于所述的生物素化酶底物是生物素化標簽。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于所述的生物素化標簽為BirAtag。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于所述跨膜蛋白是A2TM和/或LN蛋白。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)，其特征在于所述的位于第一表達載體和/或第二表達載體上的目的基因表達盒至少為一個。

11.使用權(quán)利要求1所述的篩選和分離外源基因表達細胞的載體系統(tǒng)篩選和分離外源基因表達細胞的方法，其特征在于包含步驟：

1)構(gòu)建具有攜帶生物素化酶基因表達盒和第一目的基因的第一載體，構(gòu)建具有攜帶生物素化酶底物與跨膜蛋白基因表達盒和第二目的基因的第二載體；

2)制備包含第一目的基因的第一載體或包含第二目的基因的第二載體的相應病毒；

3)將步驟1)構(gòu)建的第一載體和第二載體轉(zhuǎn)染宿主細胞；或用步驟2)的相應病毒分別或共同感染宿主細胞；

4)檢測目的基因的表達，篩選陽性細胞，進行鑒定，鑒定后的陽性細胞即為外源基因表達細胞。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于步驟2)包含將步驟1)構(gòu)建的第一載體和第二載體包裝成病毒，然后轉(zhuǎn)染宿主細胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于步驟3)包含采用流式細胞儀檢測目的基因表達細胞。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于步驟3)包含采用親合素標記磁珠篩選陽性細胞。