[發明專利]一種魚類組織快速切片方法

無效

• 申請號: 201010585906.6
• 申請日: 2010-12-13
• 公開（公告）號: CN102062709A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 葉元土;蔡春芳;殷永風;張寶彤;向朝林
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

技術領域

本發明屬于顯微組織切片領域，具體涉及一種魚類組織快速切片和染色的技術方法。

背景技術

顯微鏡觀察是對生物組織表面形態、基本結構、細微結構進行觀察和分析的有效實驗技術方法，也是臨床病理快速診斷和部分形態學研究性工作的重要實驗方法。但是，需要對生物組織進行切片處理、染色后才能進行有效的顯微鏡觀察和分析，常規的實驗切片技術方法包括石蠟切片、冰凍切片方法。

石蠟切片技術方法的一般程序是生物組織預先被固定，蛋白質等已經發生變性，一般是不可逆變性；之后用石蠟對生物組織進行浸蠟（填充細胞、組織便于切片）處理后使用組織切片機進行切片；再將切片組織中的石蠟浸提，脫蠟的切片組織才能進行染色處理。主要優點是所得切片的生物組織能夠保持原有的基本形態和結構，顯微鏡下組織形態和結構較為清晰。而主要缺點是由于要進行石蠟包埋組織快，切片后還需要對組織切片進行脫蠟處理，所需時間較長，對于一個生物組織樣品從取材到進行切片后染色觀察的過程，一般需要6～7天以上；同時，操作程序較為復雜，切片實驗工作量較大，對于要進行大批量切片處理的實驗難度較大、工作量大、時間長。

冰凍切片技術的一般操作程序是直接將生物組織快進行切片，使用冰凍切片機將生物組織快進行快速冷凍到-25℃（大約3～5min）后馬上進行切片處理，切好的組織片經過快速固定后，馬上進行染色、顯微鏡觀察和分析。冰凍切片技術方法的優點是可以保持生物組織蛋白質、酶等活性生物分子的生物活性，便于進行組織化學、酶化學和特定生物分子在細胞、組織中的定位分析；同時，從生物材料經過切片、染色到進行顯微鏡觀察分析所需要的時間短、操作快速、簡便。但是，冰凍切片技術方法的主要缺點是由于生物組織樣品沒有進行固定處理，在組織塊修切處理、冰凍切片后，細胞和組織內的各類酶、酶原等（如細胞溶酶體中的酶）被激活后，對生物組織進行一定程度的水解；同時，在-25℃下切成5～8??m進行冰凍切片后，由于室溫一般會高于0℃，導致已經切好的冰凍切片很快出現融化狀態。這些缺點導致冰凍切片操作要求非常快速，同時，染色后的生物細胞、組織的表明形態、細微結構不清晰，較為模糊。

因此，需要研究一種魚類組織快速切片方法，既可以將石蠟切片的時間縮短，也可以解決冰凍切片的組織、細胞的溶解、顯微鏡下圖像模糊的問題。

發明內容

本發明目的是提供一種魚類組織快速切片方法。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：一種魚類組織快速切片方法，包括以下步驟：

1）使用固定液將魚組織塊固定4～6小時，然后將固定后的魚組織塊修切成長2mm×寬2mm×高1～2mm大小的切片組織塊，然后使用蒸餾水按體積比1:1稀釋的雞蛋清浸泡10～20秒，立即進行冰凍切片，然后進行貼片；

2）貼片后常溫下放置3～5min，然后進行染色，染色的過程具體為：將切片浸在蘇木精溶液中80s，生理鹽水浸洗3s，浸入酸液中3～5?s，生理鹽水浸洗3s，堿液中10～15?s，伊紅溶液中1～3s，用質量分數95%的乙醇水溶液浸泡兩次，每次5?s，用100%乙醇浸泡兩次，每次5?s，然后晾干，用中性樹膠和蓋玻片封片后即可顯微鏡下觀察；其中，酸液：1000ml水中加入5ml濃鹽酸混勻，所述濃鹽酸質量分數38%；堿液：1000ml水中加入5ml濃氨水混勻，所述濃氨水質量分數28%；上述生理鹽水為魚用生理鹽水，按照質量百分比，所述魚用生理鹽水的配方為：NaCl?0.75%，KCl?0.01%，CaCl₂?0.01%，NaHCO₃?0.02%，余量為水。

上述技術方案中，步驟1）中，所述魚組織塊包括：魚腸道組織、魚肝胰臟組織及其它組織；為了實現良好的固定效果，所述魚組織塊的尺寸為長5～8mm×寬5～8mm×高3?mm。

上述技術方案中，步驟1）中，將魚組織塊固定前，先將魚組織塊在魚用生理鹽水中洗凈，然后用吸水紙吸干表面水分。

上述技術方案中，步驟1）中，所述固定液為鮑音（Bouin’s）液，所述鮑音（Bouin’s）液的配置方法為：飽和苦味酸75ml中加入福爾馬林(40%甲醛)25ml再加入冰醋酸5ml混勻。